[发明专利]一种禽流感病毒效价的测定方法

摘要

本发明公开了一种禽流感病毒效价的测定方法，通过细胞传代、稀释样品、洗板、加液、接毒、培养、计算TCID₅₀值等步骤来测定禽流感病毒效价，本发明通过对MDCK细胞进行传代铺细胞板，接种不同稀释度的禽流感病毒，一定温度下培养一定时间，通过观察细胞病变，使用Reed-Muench方法计算TCID₅₀值，测定病毒效价。本发明方法因使用细胞测定，测定结果稳定，同时排除了细胞株的外源性病源污染，使测定结果更准确。

主权项

一种禽流感病毒效价的测定方法，其特征在于：其包括以下步骤：1)细胞传代：将处于细胞对数生长期的MDCK细胞进行传代培养，并使细胞密度为1‑2×10⁵个/ml，然后将MDCK细胞铺到细胞培养板上，每孔100μL，并将细胞培养板置于温度37℃、 CO₂浓度为5%的培养箱中培养28‑30h；2)稀释样品：将禽流感病毒液用DMEM培养液进行10倍倍比稀释，得到不同稀释度的禽流感病毒液，备用；3)洗板：将上述步骤1）长满MDCK细胞的细胞培养板中的细胞培养液弃去，用0.01mol/L的磷酸盐缓冲液洗涤3‑4次；4)加液：在细胞培养板上设样品组和对照组，样品组每孔加入0.1ml含胰酶的DMEM培养液，对照组每孔加入0.2ml含胰酶的DMEM培养液，所述DMEM培养液中胰酶的质量浓度为40‑50μg /ml；然后将细胞培养板置于35℃环境中孵育15min；5）接毒：取上述步骤2）适当稀释度的禽流感病毒液接种细胞，每个稀释度接种5孔，每孔0.1ml；6）培养：将步骤5）得到的细胞培养板置于35℃、 CO₂浓度为5%的培养箱中培养100‑120h；7）测定病毒效价：观察细胞培养板中的细胞病变情况，使用Reed‑Muench方法计算TCID₅₀值，测定病毒效价。