[发明专利]一种同时显示肥大细胞与嗜酸性细胞的染色方法

摘要

本发明涉及生物技术领域，提供了一种同时显示肥大细胞与嗜酸性细胞的染色方法，采用甲苯胺蓝染色液和改良瑞氏‑吉姆萨染色液相结合的染色方法，在同一张组织学切片上显示肥大细胞和嗜酸性细胞，肥大细胞的细胞质呈现紫红色或蓝紫色，而嗜酸性细胞的细胞质呈现粉色，其他组织结构为蓝色或淡蓝色。本方法解决了分别染色后因位置结构差异难以准确判定试验结果的难题，本染色方法不仅直观性强，而且是在同一个断面上显示，保证试验结果的准确性。

主权项

1.一种同时显示肥大细胞与嗜酸性细胞的染色方法，其特征在于：具体步骤如下：步骤a：石蜡组织学切片脱蜡后复水：具体步骤包括：将已经制备好厚度为5‑8微米的石蜡组织切片经过二甲苯浸泡后除去组织上的石蜡；然后入二甲苯：无水乙醇体积比1：1的液体内浸泡5‑10分钟；再依次放入无水乙醇、95％酒精、90％酒精、85％酒精、80％酒精、70％酒精、50％酒精、蒸馏水8种液体内分别浸泡5分钟；步骤b：进行嗜酸性细胞染色首先制备染色液，将已经配制好的吉姆萨染色液、瑞氏染色液和pH 6.4的磷酸缓冲液按照体积比为1：5：14的比例进行混合形成改良的瑞氏‑吉姆萨染色液，用于嗜酸性细胞染色，将步骤a中在蒸馏水中的组织学切片放入该染色液中浸泡染色，时间为10‑15分钟，再入蒸馏水冲洗多余染色液；此步骤的判定标准：普通光学显微镜下400倍放大观察组织内除嗜酸性细胞细胞质被染成分粉色外，其他组织结构均被染成深蓝色即可，而后进入步骤c；步骤c：进行肥大细胞染色将步骤b中在蒸馏水中的组织学切片放入配制好的甲苯胺蓝染色液浸染3‑5秒，马上入蒸馏水冲洗多余染液；此步骤的判定标准：普通光学显微镜下400倍放大观察组织内除肥大细胞细胞质被染成紫红色或蓝紫色、嗜酸性细胞细胞质被染成粉色外，其他组织结构均被染成深蓝色，而后进入步骤d；步骤d：分色将步骤c中在蒸馏水中的组织学切片放入95％酒精中浸泡30‑60秒，除去多余染料，显微镜下观察分色效果；此步骤的判定标准：普通光学显微镜下400倍放大观察组织内除嗜酸性细胞细胞质染成粉色、肥大细胞的细胞质被染成紫红色或蓝紫色外，其他组织结构均被染成蓝色或淡蓝色即可；步骤e：脱水、透明、封片、观察将步骤d中在95％酒精中进行浸泡分色的组织学切片马上放入无水乙醇中浸泡3‑5分钟，然后放入二甲苯中浸泡3‑5分钟，取出组织学切片，用中性树脂胶将盖玻片盖在组织上，到此步骤即完成肥大细胞和嗜酸性细胞共显示的组织学切片制备；其中所述的甲苯胺蓝染色液每150毫升配制方法如下：配制A液：将1.0‑1.2克甲苯胺蓝放入100毫升的蒸馏水内，使甲苯胺蓝完全溶于蒸馏水中；配制B液：将0.9‑1.0克高锰酸钾放入50毫升的蒸馏水内，使高锰酸钾完全溶于蒸馏水中；将已经配制好的A液在1000℃电磁炉上煮沸10分钟，再将配制好的B液慢慢滴入A液中，形成甲苯胺蓝混合染液；将混合染液继续煮沸10分钟，使甲苯胺蓝充分被氧化；将经过煮沸的混合染液用蒸馏水补足使该混合染液的总体积为150毫升，室温下使甲苯胺蓝混合染液自然冷却，过滤后即为甲苯胺蓝染色液；所述改良瑞氏‑吉姆萨染色液配制包括瑞氏染色液的配制和吉姆萨染色液的配置，以及pH 6.4的磷酸缓冲液的配制，具体配制方法如下：瑞氏染色液的配制：将0.2‑0.3克Wright’s色素粉剂倒入100毫升的甲醇中，搅拌使Wright’s色素粉剂完全溶解在甲醇液体中，而后将此溶液放入棕色试剂瓶中保存，室温放置30天后可以使用；吉姆萨染色液的配制：将1.8‑2.0克Giemsa’s色素粉剂倒入100毫升的甲醇中，搅拌使Giemsa’s色素完全溶解在甲醇中；另将100毫升的甘油液体在水浴锅内加热，水浴锅温度为58‑60℃，加热时间持续120‑140分钟，将加热后甘油慢慢加入到上述Giemsa’s色素与甲醇的染液中，将三者充分混匀后再放入37℃恒温箱中保存10‑11小时，取出混合液体装入棕色试剂瓶中保存，室温放置48小时后可以使用；pH6.4的磷酸缓冲液的配制：将6.63克磷酸二氢钾和56.0克磷酸氢二钠粉剂倒入体积为1000毫升的蒸馏水中，搅拌后使磷酸二氢钾和磷酸氢二钠完全溶解在蒸馏水中，检测溶液的pH值，并用磷酸二氢钾或磷酸氢二钠调整溶液的pH值为6.4。