[发明专利]克隆甘薯羽状斑驳病毒O株系和甘薯病毒C全长基因组序列的引物及克隆方法

摘要

本发明公开了提供克隆甘薯羽状斑驳病毒O株系和甘薯病毒C全长基因组序列的引物，分别为克隆甘薯羽状斑驳病毒O株系引物、克隆甘薯病毒C全长基因组序列的引物和同时克隆甘薯羽状斑驳病毒O株系和甘薯病毒C全长基因组序列的引物。由于SPFMV和SPVC常常混合侵染甘薯，分离纯化极为困难，而且病毒在甘薯体内含量较低，利用纯化病毒的常规克隆方法很难获得其基因组全长序列。本发明利用SPCSV能促进SPFMV和SPVC在甘薯植株内含量升高的原理，以同时感染SPCSV、SPFMV‑O和SPVC病毒的甘薯植株为材料，提取感染病毒的甘薯植株叶片的总RNA，进行病毒全长基因组序列克隆，通过大量PCR扩增和测序，经比对、拼接后获得SPVC和SPFMV的基因组全长序列。

主权项

克隆甘薯羽状斑驳病毒O株系全长基因组序列的引物，其特征在于，包括三对引物，分别为引物对1‑F和4711‑R、引物对4689‑F和10380‑R、引物对SPFMV‑O‑4160‑F和SPFMV‑O‑5284‑R，具体的核苷酸序列如下：1‑F：5’‑AATAACACAACWCAAYACAACAYAASAAAACT‑3’4711‑R：5’‑GTGATATCATCTAARCTYTGATG‑3’4689‑F：5’‑CATCARAGYTTAGATGATATCAC‑3’10380‑R：5’‑CATATCGCGCAAGACTCATATC‑3’SPFMV‑O‑4160‑F：5’‑AAGCGACAGAGCAACAGACTTATGTACTA‑3’SPFMV‑O‑5284‑R：5’‑GATATTGCGTTGTAAATTCAACCTCACGTC‑3’其中，W＝A或T，Y＝C或T，R＝A或G，S＝C或G。