[发明专利]一种月季和野蔷薇的远缘试管嫁接方法

摘要

本发明属于生物组织培养技术领域，尤其是一种月季和野蔷薇的远缘试管嫁接方法。一种月季和野蔷薇的远缘试管嫁接方法，包括以下步骤月季组培苗的获得、野蔷薇组培苗的获得、试管嫁接和嫁接后移栽前的准备。本发明的方法具有可以人工控制植物所处的环境，保证了植物所需的光照、温度和湿度，排除了外界环境因素对嫁接成活的影响，有利于成活率的提高，排除了季节对嫁接的限制，节约了土地面积，极大地缩短了嫁接进程的优点。

主权项

一种月季和野蔷薇的远缘试管嫁接方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)月季组培苗的获得①外植体的消毒灭菌及初代培养：以带1个芽的月季茎段为外植体，用中性洗涤剂浸泡10min后用自来水冲干净，然后转入超净工作台工作，先用75％乙醇灭菌30s，无菌水冲洗3次，再用0.1％升汞处理10min、无菌水冲洗3次，接入初代培养基培养20d；②增殖培养：将茎段萌发的嫩芽切取下来，接入增殖培养基中，周期15‑18d；③生根培养：当小苗长至2.0‑3.5cm时，接入生根培养基中培养15‑25d；(2)野蔷薇组培苗的获得①外植体的消毒灭菌及初代培养：以带1个芽的野蔷薇茎段为外植体，先用中性洗涤剂浸泡10min，并用自来水冲干净后，转入超净工作台上，用75％乙醇仔细拭擦茎段后无菌水冲洗3次，再用0.1％升汞处理12min、无菌水冲洗3次，接入初代培养基培养20d；②增殖培养：将茎段萌发的嫩芽切取下来，接入增殖培养基中进行增殖培养，周期15‑20d；③生根培养：当小苗长至约2.0‑3.5cm时，接入生根培养基中培养15‑25d；(3)试管嫁接：选择野蔷薇组培苗为砧木，月季组培苗为接穗，在超净工作台上操作，先将长至2.5‑3.5cm高的野蔷薇小苗切去所有叶片以及顶芽，并在顶部中间纵切，长度为0.2‑0.4cm，然后接入生根培养基WPM+6‑BA0.5‑1.5mg/L+NAA 0.5mg/L上；再将高3‑4cm的月季小苗或者新芽，要求至少有1‑2片叶片，切成1.0‑2.5cm长的带茎尖的苗，将其基部切成“V”字形；最后将月季小苗基部小心插入野蔷薇小苗的顶部切口中；生根时间为15‑20d；(4)嫁接后移栽前的准备：将生根良好的小苗，真叶已长出，主根有3‑4条，根长为2.5‑3.5cm，置于室温下炼苗1d，然后除去瓶盖再炼苗1‑2d，洗去残余培养基，在50％多菌灵可湿性粉剂800‑1000倍溶液或者0.5％高锰酸钾溶液浸泡10min再移栽，移栽后浇透定根水，之后每间早晚浇水一次，10‑15d后即可正常生长；步骤(1)中的初代培养基为MS培养基；步骤(1)中的增殖培养基为MS+6‑BA 1.5‑3.0mg/L+NAA 0.1mg/L；步骤(1)中的生根培养基为WPM+6‑BA 0.5‑1.5mg/L+NAA 0.5mg/L；所述的WPM的配制方法为：以1000mL WPM培养基为标准，称取WPM培养基固体粉末2.14g，另取硝酸钙0.56g，加热溶解于1000mL蒸馏水中，蔗糖为20g/L，琼脂3.5‑4.0g/L，pH为5.8‑6.0；步骤(2)中的增殖培养基为1/2MS+6‑BA 1.0‑1.5mg/L+IBA 0.05‑0.1mg/L；步骤(2)中的生根培养基为WPM+6‑BA 0.5‑1.5mg/L+NAA 0.5mg/L。