[发明专利]一种红花荷组培苗快速繁育方法

摘要

本发明公开了一种红花荷组培苗快速繁育方法，本发明种子经催芽播种后，在幼苗期间选育，以幼苗的顶芽为外植体，通过外植体消毒、诱导培养、丛生芽增殖、不定根发生、炼苗移栽等过程获得了红花荷离体再植株，建立红花荷组织培养快速繁殖技术体系，可以保持红花荷母本的优良性状，有利于红花荷优良无性系苗木的规模化生产。该方法可使诱导率平均可达81.8％，增殖倍数平均可达3.0倍，炼苗20天后生根率平均可达95.8％，移栽20天后统计成活率平均可达95.2％，能很好的实现红花荷工厂化育苗要求。该方法的优点在于，采用在幼苗期间选育，并以幼苗的顶芽为外植体，建立了红花荷的组织培养快速繁殖技术体系。

主权项

1.一种红花荷组培苗快速繁育方法，其特征是，按以下步骤进行操作：（1）种子采摘：种子10至11月上旬成熟，果熟时由灰青色转为黄绿色，及时采收，采回后晾至果壳开裂，筛取种子，进行干藏；（2）种子催芽处理及播种：用质量浓度为0.1‑0.5%的高锰酸钾溶液浸泡种子30‑60分钟，自来水洗净，用40‑50℃热水浸种，自然冷却后，再换自来水浸泡24‑48小时，自来水洗净后放在催芽机中25‑30℃催芽2‑5天，催芽后，每个育苗托盘播种5‑10g种子，使育苗托盘内的种子均匀；（3）外植体的预处理：待红花荷催芽后幼苗高度在3‑5cm时，以幼苗的顶芽作为外植体，外植体在流水下冲洗1～3h，浸泡于质量浓度为3%～5%洗衣粉溶液5～10分钟后用软毛刷洗外植体，再用自来水以滴水的形式冲洗 60～90min，用蒸馏水冲洗3‑5次，于超净工作台中以质量浓度为75%～80%乙醇溶液浸泡20～60s，无菌水冲洗3～5次，再用含有质量浓度0.1～0.5%升汞溶液消毒5～15min，无菌水冲洗3～5次后用无菌滤纸吸干表面的水分，得到预处理的外植体，备用；（4）诱导培养：将经步骤（3）预处理的外植体的顶芽剪成约1.0cm 的茎段并接种到诱导培养基进行丛生芽诱导培养，接种后每天置于光照强度为1000～2000lx，培养温度为23～25℃，空气相对湿度为75%～80%的条件下光照12～14小时，培养28‑35天，得到诱导培养的丛生芽，所述的诱导培养基含有MS，0.8mg/L NAA，3.2mg/L 6‑BA，2.8mg/L KT，1.0g/L AC，30g/L蔗糖，6.0g/L琼脂，质量分数为20‑30%的聚丙烯酸，经混合配制后，使其pH为5.8；（5）丛生芽增殖：将步骤（4）诱导培养得到的丛生芽接种到增殖培养基进行不定芽增殖培养，接种后每天置于光照强度为1000～2000lx，培养温度为23～25℃，空气相对湿度为75%～80%的条件下光照12～14小时，培养38‑45天，得到增殖植株，所述的增殖培养基含有MS，0.35mg/L NAA，3.5mg/L 6‑BA，2.5mg/L KT，1.0g/L AC，30g/L蔗糖，6.0g/L琼脂，质量分数为12.5%的聚γ谷氨酸，经混合配制后，使其pH为5.8；（6）生根培养：将步骤（5）增殖植株从基部切下并接种至生根培养基中进行诱导生根，接种后每天置于光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为23～25℃，空气相对湿度为75%～80%的条件下光照12～14小时，培养7‑12天，得到生根的植株，所述的生根培养基含有MS，0.55mg/L NAA，1.8mg/L IBA，30g/L蔗糖，6.0g/L琼脂，4g/L的硫脲，经混合配制后，使其pH为5.8；（7）炼苗移栽：将生根培养的红花荷瓶苗进行在室外炼苗15‑25天，然后洗去附着于苗根系上的培养基，在1000倍的多菌灵溶液中浸泡5～10min，移栽至容器袋中进行培养，即可完成红花荷组培苗的快速繁育。