[发明专利]一株高乙醇耐受性基因工程菌及其构建方法与应用

摘要

本发明公开了一株高乙醇耐受性基因工程菌，它是过表达转录调控因子Mig1基因的酿酒酵母菌，所述的Mig1基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1中所示，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，所述的酿酒酵母菌为Saccharomyces cerevisiae S288c。本发明还公开了上述高乙醇耐受性基因工程菌的构建方法及应用。本发明构建的高乙醇耐受性基因工程菌在固定化发酵生产乙醇过程中能耐受15％浓度的乙醇，耗糖速率是原始菌株的1.30倍，提高了生物膜反应器中菌体的乙醇耐受性，适宜工业乙醇生产。

主权项

1.高乙醇耐受性基因工程菌在乙醇发酵生产中的应用；/n所述高乙醇耐受性基因工程菌，它是过表达转录调控因子锌指蛋白Mig1基因的酿酒酵母菌；/n所述的锌指蛋白Mig1基因，其核苷酸序列如 SEQ ID NO：1 中所示；/n所述的酿酒酵母菌为Saccharomyces cerevisiae S288c；/n包括如下步骤：/n(1a) 将过表达转录调控因子Mig1的酿酒酵母基因工程菌接种到培养基中，培养，得到种子液，所述的培养基，其组成如下：2g/L 葡萄糖，2g/L蛋白胨，1g/L酵母提取物；/n(2a) 将步骤(1a)中得到的种子液接种到含固定化载体的摇瓶中，固定化长膜；/n(3a) 将步骤(2a)中得到的已成膜完全的固定化载体，添加到培养基中，发酵，得乙醇；/n所述的培养基，其组成如下：200~250g/L葡萄糖，15~20g/L多聚蛋白胨，15~20g/L(NH₄)₂SO₄，10~15g/L酵母提取物， 2~3g/L KH₂PO₄，2~3g/L MgSO₄·7H₂O，30-50mg/L FeSO₄·7H₂O，30~50mg/L ZnSO₄·7H₂O， 溶剂为水；/n步骤(1a)中，所述的培养，其培养温度为30℃，培养时间为12~18h，转速为200~250rpm；/n步骤(2a)中，所述的固定化长膜，其培养温度为35℃，培养时间为60~72h，转速为200~250rpm，每20~24h换一次培养基；/n步骤(2a)中，所述的固定化载体为棉纤维；/n步骤(3a)中，所述的发酵，其培养温度为35℃，培养时间为20~24h，转速为200~250rpm。/n