[发明专利]一种基于双聚合酶延伸胸腺嘧啶原位生成铜纳米簇的microRNA检测方法在审
| 申请号： | 201610167371.8 | 申请日： | 2016-03-23 |
| 公开（公告）号： | CN105886610A | 公开（公告）日： | 2016-08-24 |
| 发明（设计）人： | 梁汝萍;迟宝珠;邱建丁 | 申请（专利权）人： | 南昌大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 南昌洪达专利事务所 36111 | 代理人： | 刘凌峰 |
| 地址： | 330000 江西省*** | 国省代码： | 江西;36 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于双聚合酶延伸胸腺嘧啶原位生成铜纳米簇的microRNA检测方法，属于光学生物传感技术领域。基于聚合酶Klenow片段和末端脱氧核苷酸转移酶的共同催化作用，在microRNA存在时，将脱氧三磷酸胸腺嘧啶核苷排列和延伸成长度较长的聚胸腺嘧啶碱基序列，并以聚胸腺嘧啶碱基序列为模板原位生成红色荧光铜纳米簇，铜纳米簇的荧光强度与microRNA浓度的对数成正比，据此实现microRNA的低背景和高灵敏检测。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 聚合 延伸 胸腺 嘧啶 原位 生成 纳米 microrna 检测 方法 | ||
【主权项】：
一种基于双聚合酶延伸胸腺嘧啶原位生成铜纳米簇的microRNA检测方法，其特征在于，向待测样品中加入模板DNA，当microRNA存在时，引物microRNA与模板DNA杂交形成引物‑模板复合物；加入聚合酶Klenow片段使其绑定在引物‑模板复合物中引物的3'‑羟基末端，催化引物延伸反应，生成与模板DNA互补的短DNA序列；加入末端脱氧核苷酸转移酶，将脱氧三磷酸胸腺嘧啶核苷添加到新生成的短DNA序列的3'‑羟基末端，催化脱氧三磷酸胸腺嘧啶核苷沿着短DNA序列的5'端向3'端延伸而形成聚胸腺嘧啶碱基序列；加入Cu(NO3)2和抗坏血酸钠，以聚胸腺嘧啶碱基序列为模板原位生成铜纳米簇，铜纳米簇的荧光强度随microRNA浓度的增加而增强，根据铜纳米簇的荧光强度判断待测样品中microRNA浓度。
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