[发明专利]酶法同时制备谷胱甘肽和腺苷酸的方法

摘要

本发明公开了一种酶法同时制备谷胱甘肽和腺苷酸的方法，该方法包括步骤：(1)利用GshF酶和Adk酶在反应罐中生成谷胱甘肽和腺苷酸；(2)在反应罐中分离固定化的GshF和Adk酶，或使用过滤设备分离游离的GshF酶和Adk酶；以及(3)分离产物GSH及AMP。本发明的制备方法优化了GSH生产的反应条件，使GSH生成浓度达到30‑50g/L，氨基酸利用率也较高；同时，使用Adk酶对反应中消耗的ATP进行部分再生，降低了ATP的消耗量；且本发明的方法能同时制备GSH和AMP。

主权项

1.一种酶法同时制备谷胱甘肽和腺苷酸的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)在反应罐中生成谷胱甘肽GSH和AMP：在反应罐中，100L无菌水的反应体系为含有底物2.8kg谷氨酸、1.8kg半胱氨酸和2.0kg甘氨酸，以及5.1kg ATP和0.83kg一水氯化锰的溶液，均匀搅拌；调节pH值至7.0，在反应体系中添加0.01kg GshF酶及0.001kg Adk酶开始反应，反应期间控制pH值为7.0，温度为37℃，反应时间6小时；(2)在过滤器中分离GshF酶及Adk酶：通过超滤方法，将步骤(1)的反应体系的反应液经过过滤器过滤分离GshF酶和Adk酶，过滤，滤出液为分离出酶之后的反应液；(3)分离产物GSH和AMP：使用盐酸调节滤出液的pH值至3.0，在离子交换柱中通过D001大孔强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂，溶液中的GSH、部分氨基酸及阳离子被吸附，穿出液中主要含有AMP，可简单脱盐后直接浓缩结晶；使用0‑0.8M NaCl梯度洗脱阳离子交换树脂上的GSH；(4)反应罐生成GSH和AMP的连续反应，即步骤(1)的连续反应：将步骤(2)中分离出的酶经由过滤器的回流口添加至反应罐，并添加原酶量5‑15％的新酶进行反应；在37℃、pH为7.0的条件下进行生成GSH和AMP的连续反应，反应时间6小时。