[发明专利]一种筛选血管紧张素转化酶抑制剂的新方法在审
| 申请号： | 201610167749.4 | 申请日： | 2016-03-21 |
| 公开（公告）号： | CN105866260A | 公开（公告）日： | 2016-08-17 |
| 发明（设计）人： | 陈君;贾冰洁;汤维维;李萍 | 申请（专利权）人： | 中国药科大学 |
| 主分类号： | G01N30/02 | 分类号： | G01N30/02;G01N30/08 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 210009 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种高效筛选血管紧张素转化酶抑制剂的新方法。该方法通过FLAG标签的使用将哺乳动物细胞中过表达的血管紧张素转化酶一步纯化并固定至磁珠上，应用于天然药物活性成分的筛选，并结合高效液相色谱‑质谱法跟踪评价酶抑制活性，使得筛选方法更为灵敏。该方法解决了纯酶的快速制备问题；且通过真核细胞过表达目标酶，最大程度地保证了酶的功能，操作上较从动物组织提取酶更为简便，减少因为操作繁琐导致酶失活的情况发生，并大大降低酶制备纯化的成本。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 筛选 血管 紧张 转化 抑制剂 新方法 | ||
【主权项】：
一种筛选血管紧张素转化酶抑制剂的新方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：融合FLAG标签的血管紧张素转化酶质粒在大肠杆菌内的转化、扩增和抽提；步骤2：293T/17细胞接种后瞬时转染步骤1中抽提质粒；步骤3：提取步骤2中细胞的胞浆总蛋白；步骤4：免疫磁珠富集并固定化步骤3中过表达的血管紧张素转化酶；步骤5：建立检测磁珠固定化ACE活性的LC‑MS方法；步骤6：阳性药验证步骤4中所富集并固定化酶的活性；步骤7：利用步骤4中富集并固定化的靶标酶，筛选血管紧张素转化酶抑制剂。
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