[发明专利]一种快速鉴别硫酸软骨素A和C的方法

摘要

本发明公开了一种快速鉴别硫酸软骨素A和C的方法，包括步骤：1、提取硫酸软骨素；2、待测样品利用三氟乙酸水解，所得水解物除酸；3、步骤2所得残余物，用1‑苯基‑3‑甲基‑5‑吡唑啉酮(PMP)衍生化，制备糖的衍生物；4、分别对各种硫酸软骨素对照品以步骤S2和S3的方法进行酸水解和衍生化；5、以液相色谱‑质谱技术分析S3和S4的衍生化产物；6、通过分析比对，鉴别样品中硫酸软骨素的种类。本发明的方法的操作性强，对样品纯度要求低，适用范围广。

主权项

1.一种快速鉴别硫酸软骨素A和C的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、提取鉴别样品的硫酸软骨素，制备粗多糖干粉试样；所述的步骤S1中采用直接水提法提取样品中的多糖，使游离的硫酸软骨素含量大于5％；S2、待测试样利用三氟乙酸水解，所得水解物利用甲醇重复三次减压除去溶剂，除酸至中性，三氟乙酸浓度为0.2mol/L，水解温度100℃，水解时间为1h；待测试样的硫酸软骨素含量与三氟乙酸、甲醇的质量体积比0.5～10mg：1mL：0.5～1mL；S3、将S2所得残余物用氨水溶解，加入1‑苯基‑3‑甲基‑5‑吡唑啉酮(PMP)衍生化，萃取得到供试液；S4、取硫酸软骨素对照品以相同操作参数重复步骤S2和S3，对照品试样中硫酸软骨素的含量与S1制备的粗多糖干粉试样中硫酸软骨素含量基本相等；S5、采用液相色谱－质谱技术分析S3和S4的衍生物：液相色谱－质谱分析条件包括：以乙腈/20mM乙酸铵水溶液为流动相，乙酸铵水溶液和乙腈的体积比为78:22，使用配备C18色谱柱的液相色谱‑质谱，采用正离子模式，选择带有硫酸基二糖片段的衍生物的准分子离子，选择m/z 766.2±0.5的离子；S6、选择色谱峰保留时间和质谱数据比对，从而推断样品中硫酸软骨素的种类。