[发明专利]一种GS表达系统细胞株的筛选方法有效
| 申请号： | 201610173410.5 | 申请日： | 2016-03-24 |
| 公开（公告）号： | CN105838736B | 公开（公告）日： | 2019-06-25 |
| 发明（设计）人： | 刘静;张彩霞;李扬;杨彬;孙文正;倪健 | 申请（专利权）人： | 广东东阳光药业有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/65 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 523808 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种GS表达系统细胞株的高通量筛选方法。在氨基亚砜蛋氨酸加压后，选择细胞活力在25％～35％的细胞池进行单克隆化筛选，将细胞池加入到含有10％条件培养基的半固体培养基上形成单克隆(细胞终浓度为150cells/mL)，再利用高通量细胞筛选系统筛选并扩大培养获得高表达的细胞株，最后对筛选的高表达细胞株进行稳定性评估。通过本发明方法，更容易获得90％稳定率以上的细胞株。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 gs 表达 系统 细胞株 筛选 方法 | ||
【主权项】：
1.一种GS表达系统细胞株的高通量筛选方法，其特征在于，由以下步骤组成：(1)在氨基亚砜蛋氨酸加压后，选择细胞活力在25％～35％的细胞池进行单克隆化筛选；(2)将步骤(1)所述的细胞池加入到含有条件培养基和甲基纤维素的半固体培养基上形成单克隆，细胞终浓度为150cells/mL；其中所述的条件培养基的体积比为10％，甲基纤维素的浓度为0.9～1.5g/mL；(3)利用高通量细胞筛选系统筛选细胞株；(4)对步骤(3)中筛选出来的细胞株进行稳定性评估；其中，步骤(2)所述条件培养基的制备方法为：取含GS空载体稳转的GS稳定细胞株进行批培养，细胞培养至密度在0.9×107～1.1×107cells/mL之间且细胞活力>95％时，经过离心分离上清和细胞，取上清用膜过滤处理后待用。
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