[发明专利]利用TR-FRET高效筛选单克隆抗体阳性克隆的方法

摘要

本发明公开了一种在单克隆抗体制备过程中，利用TR‑FRET，高效率筛选阳性克隆的方法，步骤：1)在96孔板中培养杂交瘤细胞单克隆或表达目的抗体的细胞单克隆。2)37℃培养细胞至孔面积80％时换液，再培养1天。3)在384孔板内加入带Tag的目的抗原，再加入上清、Anti‑Human/mouse IgG‑Acceptor、Non‑human/Non‑mouse Anti‑Tag‑Donnor，以同型IgG为标准品，空白样品为阴性对照，孵育2‑4h，检测A665nm/A620nm荧光比值。样品的荧光比值是阴性对照的1.2倍以上，为阳性克隆。本发明操作简单、效率高，在科研单克隆抗体制备、抗体药物开发方面，可有效加快进程。

主权项

一种利用TR‑FRET高效筛选单克隆抗体阳性克隆的方法，其特征在于：在96孔或384孔筛选微孔板内加入带有Tag的目的抗原蛋白，然后在该微孔板内加入样品、Anti‑Species IgG‑Acceptor和Anti‑Tag‑Donnor(或者Anti‑Species IgG‑Donnor和Anti‑Tag‑Acceptor)，以同型IgG作为标准品制作标准曲线，另设置空白样品孔作为阴性对照，室温孵育2‑4h或4℃过夜孵育，用多功能酶标仪读数，检测A665nm/A620nm的荧光比值。样品的A665nm/A620nm比值是阴性对照的A665nm/A620nm的1.2倍以上，可认为该样品为阳性克隆，A665nm/A620nm比值越大，表明阳性克隆表达的抗体越多。