[发明专利]一种同时测定小麦中抗倒酯及抗倒酸残留量的HPLC方法

摘要

本发明公开了一种同时测定小麦中抗倒酯及抗倒酸残留量的HPLC方法，将小麦样品制备好后，采用乙腈振荡提取，抽滤浓缩至近干，经酸性色谱甲醇定容后，加入硅胶和无水硫酸镁分散固相萃取净化后，涡旋，离心，过微孔滤膜，形成样品溶液；样品溶液采用带紫外检测器的高效液相色谱仪测定，色谱柱为Agilent Zorbax色谱柱，柱温为35℃，流速为0.6mL/min，进样量为20uL，流动相为甲醇和质量浓度为0.1％磷酸水溶液组成的混合溶液，甲醇和磷酸水溶液的体积比为65：35，波长为280nm，外标法定量测定抗倒酯和抗倒酸的含量。

主权项

1.一种同时测定小麦中抗倒酯及抗倒酸残留量的HPLC方法，其特征在于包括：步骤一混合标准溶液的配制及测定分别准确称取抗倒酯和抗倒酸标准品，用色谱甲醇溶解并配制成单独标准母液，然后采用梯度稀释法分别取抗倒酯和抗倒酸标准母液配制成抗倒酯和抗倒酸的混合标准溶液，分别配制5－7档质量浓度为0.05～5.00mg/L的抗倒酯和抗倒酸的混合标准溶液，并采用外标法定量分别注入HPLC中进行测定，以各混合标准溶液抗倒酯、抗倒酸的质量浓度C为横坐标、相应的色谱峰面积A1为纵坐标分别绘制抗倒酯、抗倒酸的标准工作曲线，得到抗倒酯、抗倒酸回归方程：抗倒酯A1＝84.929C+0.3868，抗倒酸A1＝79.991C‑0.4275，且回归方程的相关系数R2＞0.999 6，其中HPLC测定色谱条件为：高效液相色谱仪为带紫外检测器的高效液相色谱仪，色谱柱为长度250mm，内径4.6mm，粒径为5um的Agilent Zorbax C‑18色谱柱，柱温为35℃，流速为0.6mL/min，进样量为20uL，流动相为甲醇和质量浓度为0.1％磷酸水溶液组成的混合溶液，甲醇和磷酸水溶液的体积比为65：35，波长为280nm；步骤二样品前处理将采集的小麦进行剪碎或粉碎后，形成质量为m的小麦样品；步骤三抗倒酯和抗倒酸的提取准确称取步骤二制备好的小麦样品置于容器中，加入乙腈使其淹没小麦样品，并用磷酸溶液调节其pH值至酸性，在30℃～35℃下振荡提取30min～60min，之后经布氏漏斗减压抽滤，再用乙腈分两次洗涤残渣，收集全部滤液并放在旋转蒸发仪上于45℃浓缩至近干形成小麦提取浓缩液；步骤四小麦提取浓缩液的净化将步骤三制备的小麦提取浓缩液用酸性色谱甲醇定容为V体积后，转入离心管中，再加入硅胶和无水硫酸镁，在涡旋混合仪上涡旋，然后在离心机上以3800r/min离心，取上清液过0.45μm微孔滤膜，形成样品溶液，待HPLC检测；步骤五样品溶液中抗倒酯和抗倒酸残留量测定结果的计算采用外标法，运用步骤一测定混合标准溶液的色谱条件对样品溶液进行HPLC测定，测得样品溶液中抗倒酯或抗倒酸的色谱峰面积A2，代入残留量计算公式，求得样品溶液中抗倒酯及其代谢物抗倒酸的质量浓度，即得样品溶液中抗倒酯及其代谢物抗倒酸的残留量，其中残留量计算公式如下：式中：X－样品溶液中抗倒酯或抗倒酸的残留量，mg/kg；C－混合标准溶液中抗倒酯或抗倒酸的浓度，mg/L；V－样品最终定容体积，ml；A1－混合标准溶液中的抗倒酯或抗倒酸的峰面积；A2－样品溶液中的抗倒酯或抗倒酸的峰面积；m－样品质量，g。