[发明专利]重组载体及其构建方法、降解甲氰菊酯酯酶est3385的工程菌及制备方法和应用有效
| 申请号： | 201610181180.7 | 申请日： | 2016-03-28 |
| 公开（公告）号： | CN105821068B | 公开（公告）日： | 2019-11-22 |
| 发明（设计）人： | 张松柏;刘勇;张德咏;吴龙飞;罗香文;郑立敏;彭静;张卓;杜娇 | 申请（专利权）人： | 湖南省植物保护研究所 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/66;C12N1/21;C12N9/18;A62D3/02;A62D101/04;A62D101/26;A62D101/28 |
| 代理公司： | 43008 湖南兆弘专利事务所(普通合伙) | 代理人： | 赵洪;黄艺平<国际申请>=<国际公布>= |
| 地址： | 410125 *** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种重组载体及其构建方法、降解甲氰菊酯酯酶est3385的工程菌及制备方法和应用，重组载体包括pGEX‑3x表达载体和降解甲氰菊酯酯酶基因est3385；降解甲氰菊酯酯酶基因est3385为SEQ ID NO.1所示的序列；降解甲氰菊酯酯酶基因est3385位于pGEX‑3x表达载体的Bam H I和EcoRⅠ两限制性内切酶位点之间，其构建方法包括：抽提基因组DNA、设计引物、PCR扩增、酶切、连接等步骤。本发明还包括含有上述重组载体得到工程菌，由上述重组载体经热激转化至感受态细胞得到。该工程菌产量高，工艺简单，对环境友好，满足工业化生产的要求，可应用于降解甲氰菊酯。 | ||
| 搜索关键词： | 重组 载体 及其 构建 方法 降解 甲氰菊酯酯酶 est3385 工程 制备 应用 | ||
【主权项】：
1.一种降解甲氰菊酯酯酶est3385的工程菌在降解甲氰菊酯中的应用，/n降解甲氰菊酯酯酶est3385的工程菌由包括pGEX-3x表达载体和降解甲氰菊酯酯酶基因est3385的重组载体热激转化至大肠杆菌感受态细胞中得到；/n所述降解甲氰菊酯酯酶基因est3385的DNA序列为SEQ ID NO.1所示的序列；所述降解甲氰菊酯酯酶基因est3385位于所述pGEX-3x表达载体的Bam H I和EcoR Ⅰ两限制性内切酶位点之间；/n所述应用的方法为：将所述降解甲氰菊酯酯酶est3385的工程菌在培养基中培养至OD600为0.6～0.7，加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷继续培养得到菌液；将所述菌液与磷酸缓冲液、甲氰菊酯溶液混合、孵育，完成对甲氰菊酯的降解；/n所述培养基为LB培养基；所述异丙基-β-D-硫代半乳糖苷的浓度为0.5mM/L；加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷继续培养的时间为6～12h；所述孵育的温度为15～65℃；所述孵育的pH为5.0～9.0。/n
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