[发明专利]模式生物藻测定农药杀菌剂毒性的方法

摘要

本发明公开了一种模式生物藻测定农药杀菌剂毒性的方法，包括以下步骤：将农药杀菌剂配制成梯度浓度的试验药液；将生物藻原液用无菌水稀配制成藻稀释液；将试验药液与藻稀释液混合，密封条件下培养72h，每隔24h对藻细胞计数，并记录藻细胞的生物效应和试验液的理化参数；根据藻细胞的生物效应参数计算农药杀菌剂对藻细胞的半数效应浓度EC₅₀，判断农药杀菌剂的毒性。本发明的方法具有易操作、实用性强、周期短，评价终点容易判断等优势。

主权项

1.一种模式生物藻测定农药杀菌剂毒性的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、试验药液的配制：配制BG11培养基稀释液：其制备方法为：依次取10mL浓度为15.0g/100mL的NaNO3、10mL浓度为2.0g/500mL的K2HPO4、10mL浓度为3.75g/500mL的MgSO4·7H2O、10mL浓度为1.8g/500mL的CaCl2·2H2O、10mL浓度为0.3g/500mL的C6H8O7、10mL浓度为0.3g/500mL的FeC6H5O7·NH4OH、10mL浓度为0.05g/500mL的EDTANa2、10mL浓度为1.0g/500mL的Na2CO3、1mL浓度为2.86g/L的H3BO3、1mL浓度为1.86g/L的MnCl2·4H2O、1mL浓度为0.22g/L的ZnSO4·7H2O、1mL浓度为0.39g/L的Na2MoO4·2H2O、1mL浓度为0.08g/L的CuSO4·5H2O、1mL浓度为0.05g/L的Co(NO3)2·6H2O，转移至1000mL容量瓶中，并用蒸馏水定容至1000mL，在121℃下高压灭菌15min，密封并贴好标签，4℃冰箱保存，有效期2个月；将上述BG11培养基用蒸馏水稀释10倍后即为BG11培养基稀释液；移取80克/升戊唑醇悬浮种衣剂0.625mL，以BG11培养基稀释液溶解并定容至100mL容量瓶，得到浓度为500mg a.i./L的储备液；依次移取上述储备液0.300、0.600、1.200、2.400、4.800mL于250mL容量瓶中，用BG11培养基稀释液定容至250mL，得到浓度分别为0.600、1.20、2.40、4.80、9.60mg a.i./L的2倍试验药液；S2、藻稀释液的配制：用血球计数法测定羊角月牙藻的藻原液的细胞浓度为4.00×106个/mL，并用无菌水稀释100倍得到藻稀释液，藻稀释液中藻细胞浓度为4.00×104个/mL；S3、染毒：实验组：取步骤S1中配制的梯度浓度的实验药液50mL分别加入步骤S2中50mL的藻稀释液，得到梯度浓度的生物藻用培养基；试验中藻起始浓度为2.00×104个/mL；空白对照组：取50mL藻稀释液与50mL BG11培养基稀释液混匀得到生物藻用培养基；分别将实验组和空白对照组的生物藻用培养基装入三角瓶中，用锡箔纸封口，并置于智能人工气候箱中培养，控制在光照条件下放置16h，黑暗环境下放置8h；每天白天每隔2小时摇动1次，共摇动5次；S4、试验数据记录：测得试验期间各浓度组的水温为22.0℃～23.1℃，pH值为6.74～7.16，培养箱中的光照强度为5200Lux～5700Lux；染毒后48h、72h受抑制藻液细胞体积变小，观察并记录染毒后0h、24h、48h、72h藻细胞生物反应效应，包括藻细胞的抑制率和藻细胞的中毒情况；所述藻细胞的中毒情况包括：藻细胞畸形、藻液变白、藻细胞体积变小、藻细胞粘连或聚结；S5、数据处理：采用统计软件SPSS12.0，以药剂浓度的对数值为自变量x，以校正后的抑制率的机率值为因变量y，建立毒力回归方程；计算该供试物对藻类生长抑制的半数效应浓度EC50和95％置信限；S6、结果评价：根据EC50值判断农药毒级；农药对藻类的生长抑制毒性按72h后EC50的大小划分为三个等级：高毒：EC50≤0.300mg a.i./L；中毒：0.300mg a.i./L＜EC50≤3.00mg a.i./L；低毒：EC50＞3.00mg a.i./L。