[发明专利]一种非酒精性脂肪肝小鼠模型的建立方法

摘要

本发明涉及非酒精性脂肪肝病动物模型的建立，具体为伴有肥胖、血脂异常和胰岛素抵抗等特征的由高脂诱导的非酒精性脂肪肝病动物模型的建立。本发明选用C57BL/6小鼠，随机分模型组和对照组，适应性喂养后，模型组给予高脂饲料，对照组给予对照饲料，期间每周测量体重一次，10周后取血处死，检测常规血脂及肝功能；取鲜活肝测定组织内胆固醇与甘油三酯含量；另取肝组织做进行H.E.和油红O染色，判定NAFLD模型效果与质量。本发明采用高脂高热量饲料喂养，建立小鼠NAFLD模型，能展现出典型的NAFLD损害，并伴有肥胖，血脂异常和胰岛素抵抗等典型特征，不仅为研究其发病机制提供了方便，还能控制条件排除各种干扰，免除对人体的伤害，以提高复制成功率和缩短病程。

主权项

一种非酒精性脂肪肝小鼠模型的建立方法，其特征在于，建立模型的步骤为：1)、选取鼠种：SPF级雄性C57BL/6小鼠，6～8周龄，体重22±2g，饲养于本部屏障环境内，温度22～25℃，湿度50％，12小时昼夜交替，适应性喂养1周；2)、分组与造模：适应性喂养1周后，在分组上模型组与对照组均采取正态分布分组方法，即以小鼠体重为依据，将小鼠划分为高、中、低三个体重区间，将每个区间随机分配到模型组和对照组中，模型组和对照组，每组8只，模型组喂食高脂饲料，对照组喂食对照饲料，在饲养方法上采取单只单笼饲养措施，饲料定量定投，早晚各一次，维持20g/笼，保证较小的组内差异，2‑3天换垫料，给笼具消毒，垫料为刨花木屑，里面含有小木块，要求高压灭菌，造模10周，期间自由引水，水源为SPF级的灭菌水，每周称量体重一次；3)、确定小鼠状况：小鼠处死前一天，先禁食6小时，各组每只老鼠以2g/kg腹腔注射葡萄糖后，在0min、30min、60min、90min、120min，定时从尾静脉取血测定血糖，绘制药物对血糖影响曲线，模型组小鼠血糖在第30min是达到最高峰，且显著大于对照组小鼠，可以判断模型组出现较大程度的胰岛素耐受境况；4)、采血与检测：各组同一时间全部处死，处死前禁食12小时，4％水合氯醛腹腔注射麻醉，摘眼球法取血，过程应避免溶血的发生，全血37℃静置1小时，2000g，离心5min取血清，‑80℃保存，用于血清学指标的检测；5)、肝脏脂质的检测：各组以一只小鼠为例，分别各取100mg新鲜肝组织根据试剂盒自带裂解液各加1ml进行匀浆，各自匀浆液一部分用来检测甘油三酯TG和总胆固醇TC的含量，另一部分分别测定其蛋白含量，最后必须用每毫克蛋白浓度来校正甘油三酯TG和总胆固醇TC；6)、肝脏组织病理学的检测：各组以一只小鼠为例，取肝脏同一部位，分两份，一份进行石蜡切片，并对其进行H.E.染色，另一份进行冰冻切片，并对其进行油红O染色；7)、对步骤3)—步骤6)进行分析，确定利用C57BL/6小鼠经高脂诱导成功建立了伴有肥胖、血脂异常、胰岛素抵抗特征的非酒精性脂肪肝病动物模型。