[发明专利]一种鱼油产品中脂肪酸的检测方法

摘要

本发明属于成份检测技术领域，涉及一种鱼油产品中脂肪酸的检测方法，检测流程包括样液配置、皂化反应、甲酯化反应、脱水处理和定容测试五个步骤，将脱水溶液在旋转蒸发仪上进行浓缩并定容，然后使用气相色谱‑质谱联用仪进行测定得出二十碳五烯酸甲酯和二十二碳六烯酸甲酯的色谱峰谱图，分别进行二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸含量的定性分析和定量测定，通过比较样液色谱峰的保留时间与标准样品溶液的色谱峰保留时间是否一致，选择的离子是否均出现，来判断样品中是否存在二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸；减少消耗、降低成本，减轻对实验人员产生的职业危害，反应温和、迅速、高效，检测精密度高，检测原理科学，操作步骤简便，应用环境友好。

主权项

一种鱼油产品中脂肪酸的检测方法，其特征在于检测方法包括样液配置、皂化反应、甲酯化反应、脱水处理和定容测试五个步骤，其具体检测流程为：(1)样液配置：先在30‑100ml的具塞容量瓶中称取鱼油样品0.5‑3g，再加入5‑50mL正己烷充分振荡使其完全溶解得样液，并记下正己烷定容的样液刻度值；(2)皂化反应：取样液0.5‑5mL转移至10mL具塞比色管中，然后再向具塞比色管中加入浓度为1‑3mol/L的氢氧化钠的甲醇溶液0.5‑5mL，充分振荡5‑20min，再将溶液置于40‑80℃的恒温搅拌水浴锅中加热1‑2min，进行皂化反应后得皂化反应溶液；(3)甲酯化反应：待皂化反应溶液冷却至室温后，再向皂化反应溶液中加入浓度为1‑3mol/L的盐酸的甲醇溶液1‑5mL，充分振荡5‑20min，然后再置于40‑60℃的恒温搅拌水浴锅中加热1‑5min，进行甲酯化反应后得甲酯化反应溶液；(4)脱水处理：将甲酯化反应溶液的下层水溶液去掉，将上层正己烷层转移至装有无水硫酸钠的漏斗装置中进行脱水处理后得脱水溶液；(5)定容测试：再将脱水溶液在旋转蒸发仪上进行浓缩并定容至0.5‑3mL，然后使用气相色谱‑质谱联用仪进行测定得出二十碳五烯酸甲酯和二十二碳六烯酸甲酯的色谱峰谱图，分别进行二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸含量的定性分析和定量测定：a.定性分析：如果检测出的二十碳五烯酸甲酯或二十二碳六烯酸甲酯的色谱峰的保留时间与标准样品溶液测得的色谱峰保留时间相一致，且选择的离子均出现，并且所选择的离子丰度比与标准样品的离子丰度比相一致，则可判断样品中存在二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸。其中二十碳五烯酸甲酯标准样品的色谱峰保留时间为16.16min，定量离子为227.00，参考离子为87.00、143.00、74.00；二十二碳六烯酸甲酯标准样品的色谱峰保留时间为16.16min，定量离子为264.00，参考离子为265.00、180.00、222.00。其中气相色谱‑质谱联用仪的使用条件为：色谱柱为VF‑5ms(30m×25mm×25μm)石英毛细管柱；色谱柱升温程序：先以60℃保持2min，然后以15℃/min的速率升温至200℃并保持2min，再以2℃/min的速率升温至220℃，再以10℃/min的速率升温至280℃并保持5min，再以10℃/min的速率升温至300℃并保持5min；载气采用纯度≥99.999％的氦气，载气流速为1.2mL/min；进样口温度保持在260℃；进样量为1μL；进样方式：不分流进样，2min后打开分流阀和隔垫吹扫阀；电子轰击源的电子能量为70eV；离子源温度为200℃；气相色谱‑质谱联用仪的接口温度为280℃。b.定量测定：采用外标法单离子定量测定，计算公式：$Xi=\frac{Ai*Cs*V*Fi}{As*m*1000}$式中：Xi───样品中被测物i的残留量，g/kg；Ai───样品中被测物i的色谱峰面积；As───标准溶液中被测物i的色谱峰面积；Cs───标准溶液中被测物i的浓度，mg/L；V───样品最终定容体积，mL；m───样品称样量，g；Fi───被测物i与对应的脂肪酸的换算系数，二十碳五烯酸为0.962，二十二碳六烯酸为0.963。测定出二十碳五烯酸的含量为3～17g/kg，二十二碳六烯酸的含量为11～68g/kg。