[发明专利]在6-7月份基于新梢摘心获取外植体以提高砀山酥梨组培成活率的方法

摘要

本发明公开了一种在6‑7月份基于新梢摘心获取外植体以提高砀山酥梨组培成活率的方法，首先在6‑7月份，选择田间生长健壮无病虫害的一年生强旺新梢进行摘心，促使原新稍重新再诱发生长新的新梢，待新的新梢生长至10㎝～15㎝时，剪下该新稍即得组培外植体，然后再将外植体经消毒、诱导培养、增殖分化培养、接穗培养和嫁接等步骤获得砀山酥梨再生植株。本发明方法简单，操作容易，不增加其他成本。在6‑7月份也可以通过人工强摘心措施获得充足优良的组培外植体，培育出砀山酥梨再生植株，满足砀山酥梨规模化种苗繁殖或利用基因工程进行种质改良研究等；且本发明组培方法成活率达96％。

主权项

1.在6‑7月份基于新梢摘心获取外植体以提高砀山酥梨组培成活率的方法，包括外植体获得与消毒及预处理、诱导培养、增殖分化培养、接穗培养和嫁接获得砀山酥梨再生植株，其特征在于，所述外植体获得是指，在6‑7月份，选择田间生长健壮无病虫害的一年生强旺新梢进行摘心，促使刚开始封顶基本停止生长的新梢重新再诱发生长新的新梢，待新的新梢生长10㎝～15㎝，剪下该新梢作为组培外植体；所述外植体的消毒是指：将外植体用洗衣粉浸泡30min后再用流水冲洗1h，然后先放入以W/V计6％Vc溶液中浸泡15min，并不断振荡，再置于超净工作台上，用以v/V计75％的酒精溶液消毒25s，再用无菌水冲洗3次后用以v/V计0.1％的HgCl2溶液浸泡5～7min，所述的HgCl2溶液每500mL添加有200μL吐温‑80，最后用无菌水冲洗3次，进行外植体预处理；所述外植体预处理是指用经灭菌处理过的剪刀将外植体剪成2cm～3cm的小段，每段带有一个腋芽或者顶芽，之后用无菌滤纸吸干附着在表面的水分，等待接入诱导培养基；所述诱导培养是指，将预处理后的外植体形态学下端向下接入诱导培养基上，于25±1℃、光照1500Lx～2500Lx；光照时间为12h～16h/d的条件下培养25d～30d，得到分化出芽丛的试管苗；所述诱导培养基配方为MS+1.5～2.0mg/L 6‑BA+0.5mg/L NAA+0.2～0.6％AC+30g/L蔗糖+6g/L琼脂，pH值为5.8～6.0；所述增殖分化培养是指：将诱导培养得到的分化出芽丛的试管苗在继代培养基中培养，促使腋芽和不定芽的萌生，形成大量芽丛，通过将芽丛分割而达到扩繁的目的，所述继代培养基为：MS+1.0～1.5mg/L 6‑BA+0.2mg/L IBA+80mg/L PG；所述接穗培养是指：将分化出芽丛的试管苗分割，再逐个芽接入接穗培养基中，于25±1℃、光照1500Lx～2500Lx；光照时间为12h～16h/d的条件下培养30d～35d，使试管苗具有5～7片叶时即可进行嫁接，所述接穗培养基为1/4MS+80mg/L PG+0.5～1.0mg/L IBA+0.3mg/L NAA+0.3mg/L K2HPO4+0.1mg/L CaCl 2；所述嫁接是指：A，嫁接前炼苗，开瓶，光线由弱渐强，使其试管苗逐渐适应外界环境，然后贴近接穗培养基将试管苗上部全部剪切下来即可作为接穗；B，嫁接时，将砧木苗从离根茎部3㎝～8㎝处横向切断，再沿着横断面纵切一刀，根据接穗和砧木的粗细可适当调整纵切位置，若接穗和砧木一样粗或接穗粗于砧木，沿着横断面中部纵切一刀，若接穗粗度细于砧木，沿着横断面偏向一侧纵切一刀；然后迅速将接穗楔形部位插入切口，一定要将接穗与砧木一侧韧皮部对齐， 最后将接口部位用封口膜缠紧，再用塑料薄膜袋罩上扎严；后期按常规技术管理即可。