[发明专利]一种单宁酸为模板的介孔硅固定化胰蛋白酶的制备方法

摘要

本发明提供了一种单宁酸为模板的介孔硅固定化胰蛋白酶的制备方法，包括如下步骤：步骤1、外表面氨丙基三乙氧基硅烷修饰的以单宁酸为模板的介孔硅的制备；步骤2、单宁酸为模板的介孔硅固定化胰蛋白酶的制备。以单宁酸为模板分子合成介孔硅材料。单宁酸廉价环保，且尺寸较大，可以合成具有较大孔径的介孔硅材料。只在介孔硅的外表面接枝APTES，通过静电相互作用使得酶无法固定化于材料外表面，而只能固定化于介孔孔道内，提高了胰蛋白酶的利用效率，使胰蛋白酶可以重复使用。本发明得到的固定化胰蛋白酶活力高，活力回收率高达75.6％，连续操作5次，活力保持在82％以上。

主权项

1.一种单宁酸为模板的介孔硅固定化胰蛋白酶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1、一定质量的单宁酸加入到无水乙醇中，然后加入一定体积质量分数为25~28%的氨水，强烈搅拌，加入一定体积的正硅酸四乙酯，搅拌2h，然后一定体积的氨丙基三乙氧基硅烷加入到混合溶液中，室温搅拌24h，反应后依次用无水乙醇和水洗涤5次以洗脱未反应的单宁酸、氨水和氨丙基三乙氧基硅烷，将产物在25℃下干燥，得到外表面氨丙基三乙氧基硅烷修饰的以单宁酸为模板的介孔硅，简称为APTES@MSN；步骤2、用磷酸盐缓冲液溶解胰蛋白酶，制成胰蛋白酶溶液，然后加入步骤1得到的APTES@MSN，放入振荡器中，37℃振荡3~5h，振荡速率为150~200rpm；然后将固体取出浸没于醋酸钠缓冲液2~3h以洗去外表面固定化的胰蛋白酶，最后以磷酸盐缓冲液抽洗至滤液中检测不到胰蛋白酶即得到单宁酸为模板的介孔硅固定化胰蛋白酶；步骤2中，所述的醋酸钠缓冲液浓度为20mmol/L，pH为3.0~3.5。