[发明专利]一种β-NADP二钠盐含量及有关物质的测定方法

摘要

本发明公开了一种β‑NADP二钠盐含量及有关物质的测定方法，所述有关物质为NAD、ATP、ADP，包括以下步骤：配制对照品和供试品溶液；分别取对照品溶液和供试品溶液各20ul，注入液相色谱仪中，记录色谱图中β‑烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸二钠盐的峰面积，按照外标法，以无水β‑烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸二钠盐来计算HPLC含量；分别取NAD、ATP、ADP的杂质对照品溶液各20ul，注入液相色谱仪中，记录色谱图中NAD、ATP、ADP的峰面积，再按照外标法计算β‑烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸二钠盐样品中NAD、ADP、ATP的含量。本发明方法灵敏度高、可靠性强，检测成本低，适用广。

主权项

1.一种β‑NADP二钠盐含量及有关物质的测定方法，所述有关物质为NAD、ATP、ADP，其特征在于包括以下步骤：A、取sigma对照品:β‑烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸二钠盐用稀释剂溶解成浓度为1mg/ml的对照品溶液；取β‑烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸二钠盐样品用稀释剂溶解成浓度为0.5mg/ml的供试品溶液；B、分别取对照品溶液和供试品溶液各20ul，注入液相色谱仪中，记录色谱图中β‑烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸二钠盐的峰面积，按照外标法，以无水β‑烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸二钠盐来计算HPLC含量，不小于98％；C、分别取sigma对照品NAD、ATP、ADP用流动相分别溶解成浓度为5ug/ml、2.5ug/ml、2.5ug/ml的杂质对照品溶液，取β‑烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸二钠盐样品用流动相溶解成浓度为0.5mg/ml的样品溶液；D、分别取NAD、ATP、ADP的杂质对照品溶液各20ul，注入液相色谱仪中，记录色谱图中NAD、ATP、ADP的峰面积，再按照外标法计算β‑烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸二钠盐样品中NAD、ADP、ATP的含量，其中NAD、ADP、ATP分别各不超过1.0％、0.5％、0.5％；步骤C中所述流动相由6.06g三羟甲基氨基甲烷加入1000ml水溶液，再用浓磷酸调节溶液pH为4.0，超声过滤脱气制得；所述的液相色谱仪中采用C8色谱柱，流速：1.2ml/min，柱温：30℃，检测器采用紫外检测器，检测波长：260nm；还包括有系统适应性测定：分别取约25mgβ‑烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸二钠盐、NAD、ATP、ADP化学对照品用稀释剂溶解，摇匀并定容到50ml，取20ul进样记录色谱图各峰的分离度和理论塔板数，分离度的大小要不小于1.5，理论踏板数不小于2500。