[发明专利]一种禽流感H9亚型特异性血清的制备方法

摘要

本发明公开了一种禽流感H9亚型特异性血清的制备方法，首先将SPF鸡胚制备的抗原用常规方法进行灭活乳化，得到禽流感灭活疫苗，然后用灭活疫苗免疫30～35日龄SPF鸡，免疫后经过系列步骤采集鸡血、收获血清。本发明对1月龄左右鸡进行免疫即可获得满意的免疫应答反应，能得到高效价的抗体，用于禽流感H9亚型外源病毒检验的血清与抗原的中和能力对胚的要求要达到10^7.5EID₅₀/ml，对细胞的要求要能达到10^8.5TCID₅₀/ml。

主权项

一种禽流感H9亚型特异性血清的制备方法，其特征在于：其包括以下步骤：1) 灭活：选择禽流感H9亚型病毒效价≥10^8.7EID₅₀/0.1mLSPF鸡胚制备的抗原用常规方法进行灭活乳化，得到禽流感灭活疫苗；2) 第1次免疫：用上述禽流感灭活疫苗免疫若干只30～35日龄SPF鸡，免疫方法及剂量为：每只SPF鸡颈部皮下注射1mL、肌肉注射0.3mL；3) 第2次免疫：第1次免疫后21天按第1次免疫方法及剂量重复免疫一次；4) 采集鸡血：第2次免疫后21天采集少量免疫鸡血进行HI 效价测定，免疫鸡HI效价均>2¹⁰后即可对所有免疫鸡进行采血；第1次采血每只免疫鸡采血量为15～20mL，此后每隔5天采血一次，采血量为15～20mL；每次采血后测定HI 效价并计算HI效价几何平均值，当HI效价几何平均值比前面任何一次采血后测得的HI效价几何平均值低0.5log2时，即对所有免疫鸡采出全部鸡血；5）收获血清：每次采血获得的鸡血放置在37℃恒温箱中恒温2‑2.5h，再将鸡血放入2～8℃的冰箱16～24h；然后以3000‑3500r/min的转速将鸡血离心10‑15min后将血清吸出，全部血清混合后用0.20‑0.22um的滤膜过滤，无菌分装，即得到禽流感H9亚型特异性血清。