[发明专利]筛选超低岩藻糖细胞系的方法和应用

摘要

筛选超低岩藻糖细胞系的方法和应用,本发明提供了构建表达抗体和IgG‑Fc融合蛋白岩藻糖缺陷型的宿主细胞方法及抗体和IgG‑Fc融合蛋白岩藻糖活性的检测方法，及此类细胞株的具体应用。本发明通过TALEN(和/或CRISPR)技术高效敲除生产抗体或IgG‑Fc融合蛋白工程细胞中的岩藻糖基转移酶(FUT8)基因的表达来实现，通过小扁豆凝集素(LCA)加压、基因测序、流式细胞仪筛选方法，获得岩藻糖高效敲除的宿主细胞。并将岩藻糖缺陷的CHOK1宿主细胞株构建成表达抗体蛋白的稳定工程细胞株，获得抗体蛋白后进行糖型分析，结果表明岩藻糖敲除效率达99％以上。

主权项

1.在哺乳动物宿主细胞中产生包含低抗体或IgG‑Fc融合蛋白岩藻糖含量抗体的方法，包括将靶向FUT8基因序列的外显子7的TALEN载体引入宿主细胞，抑制fut8的表达并降低抗体或IgG‑Fc融合蛋白的岩藻糖化水平，通过LCA方法分选获得岩藻糖缺陷型的稳定宿主细胞株；其中，TALEN载体上靶向FUT8基因的外显子7的TALEN编码序列的TALEN‑L、TALEN‑R和Spacer序列分别为SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.21、SEQ ID NO.22，进行序列分析所使用的PCR引物选自SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14、SEQID NO.15和SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.23和SEQ ID NO.24、SEQ ID NO.25和SEQ ID NO.26；所述方法以非疾病的诊断或治疗为目的。