[发明专利]集成蛋白质前处理和多肽高pH值反相分级的蛋白质组反应器及其应用

摘要

本发明涉及集成蛋白质前处理和多肽高pH值反相分级的蛋白质组反应器及其应用，所述蛋白质组反应器包括移液枪枪头(1)、强阳离子交换树脂填料(2)和固相萃取膜(3)；固相萃取膜(3)填充于移液枪枪头(1)的下端，强阳离子交换树脂填料(2)填充于移液枪枪头(1)下端并位于固相萃取膜(3)之上。本发明提供的蛋白质组反应器集成了蛋白质的预富集、还原、烷基化、酶解、多肽的除盐、洗脱和高pH值反相分级等操作，可用于少量细胞或者组织样品的蛋白质大规模鉴定和定量蛋白质组学中；此外，本发明提供的蛋白质组反应器技术可实现基于自动液体处理平台(例如安捷伦Bravo平台等)的自动化操作，提高样品处理通量和定量分析准确性。

主权项

1.一种基于蛋白质组反应器的生物样本前处理和多肽高pH值反相分级的方法，其特征在于，所述蛋白质组反应器包括移液枪枪头（1）、强阳离子交换树脂填料（2）和固相萃取膜（3）；固相萃取膜（3）填充于移液枪枪头（1）的下端，强阳离子交换树脂填料（2）填充于移液枪枪头（1）下端并位于固相萃取膜（3）之上；所述蛋白质组反应器用于生物样本的前处理和多肽高pH值反相分级的具体方法为：将生物样本中的蛋白质样品富集在强阳离子交换树脂填料上进行还原、烷基化和酶解，酶解完成后将生成的多肽转移到固相萃取膜上，再进行高pH值反相分级，所述高pH值是指pH值高于9；所述蛋白质组反应器用于生物样本中样品的前处理和多肽高pH值反相分级的具体操作步骤为：（1）细胞或者组织样品经裂解液裂解并酸化后，加到预先活化好的蛋白质组反应器中，通过离心使蛋白质富集到强阳离子交换树脂填料上；（2）使用含有机溶剂的溶液或者纯有机溶剂清洗掉结合到固相萃取膜上的表面活性剂，依次加入相应的试剂和酶，完成蛋白质的还原、烷基化和酶解；（3）使用盐溶液将生成的多肽从强阳离子交换树脂填料转移到固相萃取膜上；（4）除盐后，使用高pH值的含有不同比例有机溶剂的溶液按从低到高的比例依次将多肽洗脱下来，进行高pH值反相分级；其中，步骤（1）所述裂解液中的表面活性剂是高pH值反相分级和液相色谱‑质谱兼容的，所述表面活性剂为正十二烷基‑β‑D‑麦芽糖苷、胆固醇琥珀酸单酯三羟甲基氨基甲烷盐中的任意一种或两种的混合物。