[发明专利]一种IBD-ND-AI-大肠杆菌病四联高免卵黄抗体制备方法

摘要

本发明提供了一种抗体效价确切、治疗效果优良、预防效果显著的IBD‑ND‑AI‑大肠杆菌病四联高免卵黄抗体制备方法，该方法主要包括以下步骤：原材料准备、基础免疫、强化免疫、效价监测并集卵、抗体提取及精制及维持免疫。免疫接种过程中IBD疫苗免疫与ND、H9及鸡大肠杆菌疫苗免疫分开，且先于后者7‑10天接种，有助于保证四联卵黄抗体中IBD的抗体浓度相对较高，且经IBD疫苗的刺激，能保证受免鸡免疫中枢的活性，更快的对后续接种的ND、H9及鸡大肠杆菌疫苗产生免疫应答。

主权项

一种IBD‑ND‑AI‑大肠杆菌病四联高免卵黄抗体制备方法，其特征在于包括如下制备步骤：1)原材料准备：选取市售IBD、ND、H9、鸡大肠杆菌病疫苗，待免疫接种的即将开产的健康母鸡；2)基础免疫：IBD疫苗免疫母鸡后7‑10天再用ND、H9及鸡大肠杆菌疫苗免疫母鸡；3)强化免疫：对应基础免疫7‑14天后，进行两次强化免疫，两次强化免疫的时间间隔为10‑20天；4)效价监测并集卵：当IBD抗体琼扩效价≥1:128，H9抗体HI效价≥1:2048，新城疫抗体HI效价≥1:1024，大肠杆菌ELISA效价≥1:1024时，开始收集高免蛋，用于后续卵黄抗体的提取；5)抗体提取及精制：首先将高免蛋浸入新洁尔灭溶液中浸泡消毒、晾干备用，其次是打蛋，分离并收集卵黄，去除系带等附着物，再次是打散卵黄制成卵黄液，加入醋酸盐缓冲液，搅拌后粗滤，然后是向粗滤液中加入辛酸，剧烈搅拌并过滤至澄清，最后是微孔过滤除菌即得精制卵黄抗体。6)维持免疫：步骤4)中其中一种抗体效价降低一个滴度时，进行一次维持免疫。