[发明专利]一种荆半夏种茎快速繁殖方法

摘要

本发明公开了一种荆半夏种茎快速繁殖方法，步骤是A﹑外植体的选择和诱导选用叶柄作外植体，以叶片展开后的叶柄作外植体，经自来水冲洗后，加入酒精，浸泡,倒掉酒精，用无菌水清洗，用新洁儿灭浸泡，倒掉新洁尔灭，用无菌水清洗，加入升汞溶液和吐温，浸泡，用无菌水清洗后接种到诱导培养基，培养形成带芽的球状体；B﹑球状体芽的增殖经过诱导将获得带有芽点的球状体，在超净工作台内将芽切开，切开的球状体含芽点，增殖培养；C、种茎的形成带芽的球状体经过增殖培养后，取下单个芽点，在超净工作台接种到种茎培养基，促使种茎增大。方法易行，操作简便。能有效的降低了内生菌对半夏无菌培养的影响，提高了组培快繁效率。增殖效率高。

主权项

一种荆半夏种茎快速繁殖方法，其步骤是： A﹑外植体的选择和诱导：选用叶片未展开的叶柄作外植体，外植体的诱导过程如下：取下选取的叶柄外植体，经自来水冲洗10‑30min后，在超净工作台中将上述叶柄外植体移到一个经灭菌的烧杯中，加入75%v/v酒精，浸泡28－32s，倒掉酒精，用无菌水清洗2－4次，然后加入0.1%m/v新洁尔灭浸泡2－4min，倒掉新洁尔灭，用无菌水清洗4－6次，然后加入0.2%m/v升汞溶液和1‑2滴吐温，浸泡8－12min，期间应旋转烧杯，使药剂和外植体表面接触，然后用无菌水冲洗4－6次，接种时将叶柄在滤纸上晾干，以平躺的方式接种到培养基上，诱导培养基为：MS+TDZ 0.5‑1.0mg/L ，蔗糖30g/L，pH5.4－pH6.2，接种完毕后将培养瓶放入培养室培养，培养室温度24－26℃，光照1500~2500 lx，光照时间为：10‑12h/d，培养25‑30d形成带芽的球状体；B﹑球状体芽的增殖：经过步骤（A）的诱导将获得带有芽点的球状体，在超净工作台内将芽切开，切开的球状体含2‑3个芽点，增殖培养密度控制在0.2个/cm2，芽增殖培养基为：MS+6‑BA 0.5‑1.0 mg/L，蔗糖30g/L pH5.8，培养条件为：温度24－26℃，光照1500~2500 lx，光照时间：10h/d，24－26d达到充分增殖；C、种茎的形成：带芽的球状体经过增殖培养后，取下单个芽点，在超净工作台接种到种茎培养基，种茎培养基配方为：1/2MS，蔗糖60g/L，pH5.8，培养条件为：温度24－26℃，光照1500~2500 lx，光照时间：10h/d，培养18－22d 后形成完整植株，此时，见叶片和根系从切下的芽点上长出，该芽点已具备半夏块茎的特性，然后，将培养瓶放在室温下有自然光照的地方，有利于营养物质在种茎中进一步积累，促使种茎增大。