[发明专利]一种高效易感PRRSV的BHK-21细胞系的构建方法

摘要

本发明涉及细胞系构建，具体公开了一种利用PB转座系统加CAG强启动子策略制备高效易感PRRSV的BHK‑21细胞系的构建方法。本发明通过PiggyBAC转座系统构建含有pCD163、pCD169和sCD151基因的CDS序列的表达载体，并将所构建载体单独或者以不同组合转染导入BHK‑21细胞，使BHK‑21细胞稳定表达上述基因。本发明通过实验证实，以pCD163为主的三个受体共表达的转基因细胞系具有高效感染PRRSV的能力。说明了三种受体联合作用可以大幅提高不易感细胞对PRRSV易感性，成功获得了对病毒制备、感染机制研究以及PRRSV疫苗的制备等具有重要应用价值的BHK‑21‑TTG细胞系。同时也提供了一种具有广阔应用前景的PRRSV各种易感细胞制备的方法。

主权项

一种高效易感PRRSV细胞系的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)构建重组表达载体：将pCD163、pCD169和sCD151基因的CDS序列分别连接到包含PB转座系统和CAG强启动子的真核表达载体上，获得三种重组表达载体；(2)构建高效易感PRRSV细胞系：将步骤(1)获得的三种重组表达载体，通过共转染的方法导入细胞，得到共表达pCD163、pCD169和sCD151基因的转基因细胞系；所述pCD163基因的CDS序列如SEQ ID No.1所示，所述pCD169基因的CDS序列如SEQ ID No.2所示，所述sCD151基因的CDS序列如SEQ ID No.3所示。