[发明专利]一种分离鸡胚血来源的原始生殖干细胞的方法在审
| 申请号： | 201610210520.4 | 申请日： | 2016-04-05 |
| 公开（公告）号： | CN105779377A | 公开（公告）日： | 2016-07-20 |
| 发明（设计）人： | 王丙云;张晓芳;陈志胜;陈胜锋;计慧琴;李东升;冼琼珍;刘樱;冯娜 | 申请（专利权）人： | 佛山科学技术学院 |
| 主分类号： | C12N5/073 | 分类号： | C12N5/073 |
| 代理公司： | 广州新诺专利商标事务所有限公司 44100 | 代理人： | 许英伟 |
| 地址： | 528000 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种分离鸡胚血液来源原始生殖细胞的方法。其在制备微量玻璃针采血装置的基础上，利用玻璃细针虹吸原理快速有效的从血液分离鸡原始生殖细胞。包括以下步骤：微量玻璃针采血装置的制备；14HH鸡胚血液的采集；采集的14HH鸡胚血液置入含有BRL‑3A细胞饲养层和PGCs完全培养液的培养体系中培养，原代培养10‑15d即可纯化细胞；将纯化后PGCs重新置入含有完全培养基的BRL‑3A饲养层细胞上进行体外培养扩增；对体外培养扩增的PGCs进行间接免疫荧光检测，包括SSEA‑1和DAZL表面标记；对体外培养扩增的PGCs进行RT‑PCR鉴定。经鉴定，通过本发明方法获得的细胞为阳性原始生殖细胞，且该细胞具有较好的体外增殖能力。本方明方法具有简便、快速、获取的细胞多等特点。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 分离 鸡胚血 来源 原始 生殖 干细胞 方法 | ||
【主权项】：
一种分离鸡胚血来源的原始生殖干细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)微量玻璃针采血装置的制备；(2)14HH鸡胚血液的采集；(3)采集的14HH鸡胚血液置入含有BRL‑3A细胞饲养层和PGCs完全培养液的培养体系中培养，原代培养10‑15d即可纯化细胞；(4)将纯化后PGCs重新置入含有完全培养基的BRL‑3A饲养层细胞上进行体外培养扩增；(5)对体外培养扩增的PGCs进行间接免疫荧光检测，包括SSEA‑1和DAZL表面标记；(6)对体外培养扩增的PGCs进行RT‑PCR鉴定，鉴定的基因包括Nanog、PouV、SOX 2、DAZL、CVH。
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