[发明专利]一种促进白菜小孢子胚发生和直接成苗的方法

摘要

本发明提供了一种促进白菜小孢子胚发生和直接成苗的方法，以解决现有小孢子培养技术中小孢子胚胎发生率低、直接成苗率低、培养周期长的问题。通过向诱导培养基NLN中添加组蛋白去乙酰化酶抑制剂—曲古抑菌素A(TSA，TrichostatinA)，以提高白菜小孢子胚胎发生率和直接成苗率。在添加0.025μM~0.10μM TSA的NLN诱导培养基中，白菜的小孢子胚胎发生率提高了1.46~2.48倍，直接成苗率提高了1.12~1.39倍。培养基为NLN培养基+0.025μM~0.10μM TSA+130 g·L^‑1蔗糖+100μL灭菌后的琼脂糖0.5g·L‑1、活性炭10g·L‑1的混合液。

主权项

一种促进白菜小孢子胚发生和直接成苗的方法，其特征包括如下步骤：（1）小孢子培养采用常规白菜游离小孢子培养方法分离纯化小孢子，用含TSA的浓度为0.025μM ~ 0.10 μM NLN培养基培养小孢子，小孢子密度为1×10⁵～2×10⁵个/mL NLN培养基；将每5 mL小孢子悬浮液分装入为60 mm×15 mm的无菌玻璃培养皿内, 每皿添加100μL灭菌后的琼脂糖0.5g·L‑1、活性炭10g·L‑1的混合液，用石蜡膜封口后，先在33℃恒温箱中热激处理1d，再转至25℃下静置暗培养，至肉眼可见胚状体后，再转移到转数为50rpm的摇床上继续暗培养；（2）胚状体成苗在接种小孢子后第18天转接胚状体到添加30 g·L^‑1蔗糖，7.5 g·L^‑1琼脂，0.1 g·L^‑1活性炭的MS培养基上，其pH为 5.8～6.0，高温湿热灭菌；接种量为每100mL广口三角瓶含50mL培养基接种5个胚状体；于25±1℃，16h小时光照/天条件下培养；15～20天后胚状体发育为根、茎、叶明显健壮的小苗。