[发明专利]一种原代小鼠或大鼠软骨细胞的分离培养方法

摘要

本发明公开了一种原代小鼠或大鼠软骨细胞的分离培养方法，在采集软骨细胞的过程中具有打磨软骨表面的步骤，最大限度地排除了后续滑膜细胞的污染；采取过程开创性的采用了活检针切取内部软骨组织，使得采样直接针对目的细胞，不但直接有效，同时巧妙地避免了潜在的细菌和真菌污染；同时，本发明的原代小鼠或大鼠软骨细胞的分离培养方法，使用的特殊制备的复合酶消化液，相比传统单一的胶原酶预热消化，不但避免了对组织过度消化过度吹打所导致的细胞活性低、得率差的问题，而且消化的更均匀透彻。

主权项

一种原代小鼠或大鼠软骨细胞的分离培养方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：软骨组织的预处理清理离体的半月板，并利用含双抗和两性霉素B的D‑hanks溶液冲洗，然后打磨半月板表面，再次使用含双抗和两性霉素B的D‑hanks溶液冲洗；步骤2：取软骨细胞使用小型活检针刺入步骤1处理后的半月板，切取半月板内部软骨细胞；步骤3：酶消化将步骤2获得的软骨细胞置于复合酶消化液中消化，其中复合酶消化液中包括质量比为1:1:1:1的I型胶原酶、II型胶原酶、IV型胶原酶和Dispase酶；步骤4：分离培养软骨细胞将步骤3消化完毕的软骨细胞过70um筛网，进行离心洗涤，然后进行重悬并再次离心，最后用无血清培养液再次重悬，分离得到软骨细胞，使用含10％‑20％胎牛血清、2％双抗的培养基在37℃5％CO₂的培养箱中进行培养。