[发明专利]一种原代小鼠或大鼠乳腺上皮细胞的分离培养方法

摘要

本发明公开了一种原代小鼠或大鼠乳腺上皮细胞的分离培养方法，本发明的原代小鼠或大鼠乳腺上皮细胞的分离培养方法，采用特制的复合酶进行长期消化，使得获得细胞总量大，分离度高，活率高；由于采集方式创造性地引入了活检针，获得的乳腺上皮细胞细菌、真菌和其他细胞的污染概率极低，同时还能够进行传代培养，为以乳腺上皮细胞培养为基础的相关研究提供了良好的细胞培养解决方案。

主权项

一种原代小鼠或大鼠乳腺上皮细胞的分离培养方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：乳房组织的预处理清理离体的乳房组织，并利用含双抗和两性霉素B的D‑hanks溶液冲洗；步骤2：取乳腺上皮细胞使用活检针刺入步骤1处理后的乳房组织，切取部分表面组织，丢弃；更换活检针，通过相同路径进入，切取内部乳腺上皮细胞；步骤3：酶消化将步骤2获得的乳腺上皮细胞置于复合酶消化液中消化，其中复合酶消化液中包括质量比为1:1:1:1的I型胶原酶、II型胶原酶、IV型胶原酶和Dispase酶；步骤4：分离培养乳腺上皮细胞将步骤3消化完毕的乳腺上皮细胞过70um筛网，进行离心洗涤，然后进行重悬并再次离心，最后用无血清培养液再次重悬，分离得到乳腺上皮细胞，使用上皮细胞培养基在37℃5％CO₂的培养箱中进行培养。