[发明专利]一种外源基因DNA片段克隆到质粒载体相邻或重叠的限制性内切酶酶切位点的方法有效
| 申请号： | 201610219972.9 | 申请日： | 2016-04-07 |
| 公开（公告）号： | CN105779481B | 公开（公告）日： | 2019-01-11 |
| 发明（设计）人： | 廖东庆;黄日波;李晓明;韦航;韦旭钦;王青艳 | 申请（专利权）人： | 南宁中诺生物工程有限责任公司 |
| 主分类号： | C12N15/66 | 分类号： | C12N15/66 |
| 代理公司： | 广西南宁公平知识产权代理有限公司 45104 | 代理人： | 王素娥 |
| 地址： | 530003 广西壮族*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种外源基因DNA片段克隆到质粒载体相邻或重叠的限制性内切酶酶切位点的方法。质粒载体用限制性内切酶A\B、A\C分别酶切，得到AB、BA及AC、CA四个DNA片段。(B、C为质粒载体上相邻或重叠的限制性内切酶酶切位点)。外源基因DNA片段用限制性内切酶B、C酶切，得到BC片段。AB、BC、CA与AC、BC、BA这三个DNA片段分别进行连接、转化，涂布在筛选平板上培养，再挑取单菌落进行筛选，可以得到外源基因连入质粒载体正反两个方向的重组质粒。本发明的优点是：使用本发明构建的质粒载体，无法进行双酶切的相邻或重叠的限制性内切酶酶切位点也可作为克隆外源基因DNA片段的选择；另外，外源基因DNA片段连入载体的两个方向也可实现。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基因 dna 片段 克隆 质粒 载体 相邻 重叠 限制性 内切酶酶切位点 方法 | ||
【主权项】：
1.一种外源基因DNA片段克隆到质粒载体重叠的限制性内切酶酶切位点的方法，其特征在于，操作步骤为：将质粒载体分别用限制性内切酶A\B及A\C进行双酶切，胶回收后获得AB、BA及AC、CA四个DNA片段；外源基因DNA片段用限制性内切酶B、C分步或双酶切，得到BC片段；AB、BC、CA与AC、BC、BA这三个DNA片段分别进行连接、转化，涂布在筛选平板上培养，再挑取单菌落进行筛选，可以得到外源基因连入质粒载体正反两个方向的重组质粒。
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