[发明专利]一种能直接反应I型干扰素应答的慢病毒载体及其制备方法与应用

摘要

本发明提供了一种能直接反应I型干扰素应答的慢病毒载体，通过克隆技术将pDonor‑IRF3全长的穿梭质粒同源重组克隆到慢病毒BiLC表达载体中；所述慢病毒BiLC表达载体由高斯荧光素酶从109位氨基酸的位置分为N端和C端，记为GlucN和GlucC，形成慢病毒表达载体IRF3‑BiLC。本发明的有益效果第一与目前是用的I型干扰素应答报告系统相比，IRF3‑BiLC的报告系统具有特异的反应I型干扰素的应答。第二IRF3‑BiLC的报告系统能够直接且快速的反应瞬时的或者是持续性的I型干扰素的应答。

主权项

一对能直接反应I型干扰素应答的慢病毒载体pBiLC‑IRF3‑GlucN和pBiLC‑IRF3‑GlucC，其特征在于由以下方法构建得到：步骤1、通过特异性引物将IRF3基因进行扩增，并对扩增产物进行双酶切，然后通过T4连接酶连接至pEntry载体，提取得到的pEntry‑IRF3全长的穿梭质粒；步骤2、高斯荧光素酶从109位氨基酸的位置分为N端和C端，记为GlucN和GlucC，采用GlucN和GlucC部分分别克隆到慢病毒载体上；步骤3、通过克隆技术，将构建好的pEntry‑IRF3全长的穿梭质粒同源重组克隆到步骤2中得到的可诱导型的慢病毒表达载体，形成能够分别表达IRF3‑GlucN融合蛋白和IRF3‑GlucC融合蛋白的慢病毒载体pBiLC‑IRF3‑GlucN和pBiLC‑IRF3‑GlucC；用于IRF3基因扩增的特异性引物的序列为SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2。