[发明专利]高效液相色谱串联质谱技术检测唾液中褪黑素的方法及试剂盒

摘要

本发明提供了一种高效液相色谱串联质谱技术检测唾液中褪黑素的方法；采用高效液相色谱串联质谱技术检测经过预处理的唾液中褪黑素，利用高效液相色谱将褪黑素与杂质分离，内标法定量，以褪黑素的同位素作为内标，以标准品与内标的浓度比为X轴，标准品与内标的峰面积比为Y轴，建立校准曲线，计算褪黑素的含量。本发明方法灵敏度高、特异性强、准确性好，前处理过程简单；分析时间短，4.2min内即可完成褪黑素的分析，精密度及加标回收率满足检测要求。

主权项

高效液相色谱串联质谱技术检测唾液中褪黑素的方法，其特征在于，包括如下步骤：采用高效液相色谱串联质谱技术检测经过预处理的唾液中褪黑素，利用高效液相色谱将褪黑素与杂质分离，再利用同位素内标法定量，以标准品与内标物的浓度比为X轴，标准品与内标物峰面积比为Y轴，建立校准曲线，计算褪黑素的含量；(1)具体色谱条件为：流动相A：体积比为0.05％的甲酸水；流动相B：甲醇，纯度为色谱纯，浓度为100％；色谱柱型号：Phenomenex Kinetex‑C18，50×2.1mm，2.6μm；采用梯度洗脱的方式，见表1；流速为0.2ml/min，柱温为40℃，进样体积为20μl；表1流动相梯度洗脱参数(2)质谱条件：在电喷雾电离正离子检测模式下，采用多反应监测(MRM)的质谱扫描模式；喷雾电压为5000V；碰撞气为5；气帘气为10；离子源气流GS1为60，GS2为60；离子源温度为450℃；检测离子对m/z：褪黑素233.2/174.1、内标d4‑褪黑素237.1/178.2；褪黑素及内标的去簇电压、碰撞电压、碰撞能和碰撞池出口电压参数见表2；表2褪黑素及内标的质谱参数