[发明专利]一种黄樟油素型樟树嫩枝组培繁殖方法

摘要

本发明公开了一种黄樟油素型樟树嫩枝组培繁殖方法，其特征在于包括外植体选择、外植体处理、初始芽诱导培养、增殖培养、壮芽培养和生根培养工序，采集黄樟油素型樟树的树冠外围生长健壮的当年生嫩枝作为外植体，对外植体进行修剪、灭菌消毒处理后接种于初始芽诱导培养基中获取初始芽，再将初始芽接种于增殖培养基中经过4‑5个周期增殖培养，形成丛生芽，将丛生芽接入壮芽培养基中培养，最后将高≥2cm的单芽插入生根培养基中诱导生根。本发明操作过程简便，培养周期短，继代芽产量大,并且质量优，增殖系数达到5以上，达到组培苗产业化技术要求，具有很好的经济效益、生态效益和社会效益。

主权项

一种黄樟油素型樟树嫩枝组培繁殖方法，其特征在于：包括外植体选择、外植体处理、初始芽诱导培养、增殖培养、壮芽培养和生根培养工序，采集黄樟油素型樟树的树冠外围生长健壮的当年生嫩枝作为外植体，对外植体进行修剪、灭菌消毒处理后接种于初始芽诱导培养基中获取初始芽，再将初始芽接种于增殖培养基中经过4‑5个周期增殖培养，形成丛生芽，将丛生芽接入壮芽培养基中培养，最后将高≥2cm的单芽插入生根培养基中诱导生根，具体操作步骤如下：（1）外植体选择：在至少连续3天晴朗的气候里，采集黄樟油素型樟树的树冠外围生长健壮的当年生嫩枝作为外植体；（2）外植体处理：将外植体置于自来水下冲洗10‑15 min，然后去除外植体叶片，再将外植体浸泡在体积浓度 0.1%的甲氨基阿维菌素苯甲酸盐溶液中，控制浸泡时间15‑20 min，最后用纯净水洗净药物，将外植体裁成带至少1个腋芽，1.5‑3cm长的茎段，视茎段木质化程度分类置放容器内，对外植体消毒，备用；（3）初始芽诱导培养：将步骤（2）得到的外植体接种于初始芽诱导培养基中培养，初始芽诱导培养方法为：首先将接种好的外植体置于4‑8 ℃的低温环境,暗培养8‑10 d，再转入温度22‑25 ℃,光照强度1000‑2000 lux,光照10‑12 h/d的条件下培养，培养40‑50 d，初始芽萌发、生长；所述的初始芽诱导培养基的配方为：改良ER培养基+6‑BA 6.0‑8.0 mg/L+NAA 2.0‑3.0 mg/L+KT 1.0‑2.0 mg/L+ZT 1.5‑2.0 mg/L+ VC 15 mg/L +L‑半胱氨酸20mg/L +叶酸10mg/L+VB2 15 mg/+琼脂粉3.6 g/L+蔗糖20 g/L；（4）增殖培养：将高≥1cm的初始芽接入增殖培养基中进行增殖培养，增殖培养方法为：将接种好的初始芽置于温度25‑30 ℃，光照强度2000‑3000 lux，光照12‑14 h/d的条件下培养，35‑40 d转接一次，循环往复，经4‑5个周期的培养，形成丛生芽；所述的增殖培养基的配方为：改良ER培养基+6‑BA 6.0‑8.0 mg/L+NAA 2.0‑3.0 mg/L+ZT 0.5‑1.0 mg/L+VC 15 mg/L+VB2 15 mg+L‑半胱氨酸 20 mg/L+琼脂粉 3.6 g/L+蔗糖 30 g/L；（5）壮芽培养：将步骤（4）得到的丛生芽进行切割，4‑5颗芽/丛，插入壮芽培养基中，置于温度25‑30 ℃，光照强度4000‑7000 lux，光照12‑14 h/d的环境中培养，培养35‑40 d，形成壮芽；所述的壮芽培养基的配方为：改良ER培养基+6‑BA 3.0‑4.0 mg/L+NAA 1.0‑1.5 mg/L+VC 15 mg/L+VB2 15 mg+L‑半胱氨酸 20 mg/L+琼脂粉 3.6 g/L+蔗糖 30 g/L；（6）生根培养：将步骤（5）得到的高≥2cm的单芽插入常规的生根培养基中诱导生根；余下小芽丛再次接种于步骤（4）的增殖培养基中继续增殖，然后再重复步骤（5），循环往复，获得大量壮芽；以上所述的改良ER培养基的配方为：NH4NO3 1200 mg/L+KNO3 1900 mg/L+CaCl2·2H2O 440 mg/L+MgSO4·7H2O 370 mg/L+KH2PO4 340 mg/L+H3BO3 0.63 mg/L+MnSO4·4H2O 22.3 mg/L+ZnSO4·4H2O 8.64 mg/L+Na2MoO4·H2O 0.025 mg/L+CuSO4·5H2O 0.0025 mg/L+CoCl2·6H2O 0.0025 mg/L+FeSO4 27.8 mg/L+NaEDTA 37.3 mg/L+肌醇 50 mg/L+烟酸 0.5 mg/L+盐酸吡哆醇0 .5 mg/L+甘氨酸 2 mg/L。