[发明专利]一种高溶解性红小豆分离蛋白加工方法

摘要

一种高溶解性红小豆分离蛋白加工方法，主要解决现有红小豆分离蛋白加工方法制取的红小豆分离蛋白溶解性差以及微波处理条件不易控制等问题。本发明首先制备原样品，然后经微波处理制备微波处理后的红小豆分离蛋白粉末；最后对原样品与微波处理后的红小豆分离蛋白粉末分别进行二级结构的测定、内源性荧光光谱测定、粒径实验测定、表面疏水性及溶解性的测定，以表征红小豆分离蛋白溶解性。本发明的工艺方法应用广泛、操作简便且节省加工时间，制得的红小豆分离蛋白具有较高溶解性，克服了原蛋白溶解性差的缺陷。

主权项

1.一种高溶解性红小豆分离蛋白加工方法，其特征在于，具体由以下步骤实现：a、制备原样品b、制备微波处理后的红小豆分离蛋白液体(1)将冻干得到的红小豆分离蛋白粉末加入去离子水，所述红小豆分离蛋白粉末与去离子水以质量体积比为1：10的比例混合，承制于烧杯中；(2)再向其中加入0.1g偏磷酸钠，用搅拌桨在室温下搅拌24h，得到红小豆分离蛋白混合液；(3)然后将红小豆分离蛋白混合液用去离子水不断清洗，直至所述红小豆分离蛋白混合液颜色与去离子水颜色相仿；(4)然后将清洗后的红小豆分离蛋白混合液与去离子水等体积混合搅拌，得到红小豆分离蛋白液体；(5)将所述红小豆分离蛋白液体倒入平板，放入微波炉中以160瓦，320瓦或480的功率和时间在5分钟或10分钟的条件下进行处理，保证每次处理的样品体积相等，并且微波处理过程中每5分钟需要取出放入冰水浴中冷却下，确保温度在60‑65℃，得到微波处理后的红小豆分离蛋白液体；c、将所述步骤b得到的微波处理后的红小豆分离蛋白液体进行冷冻干燥，并置于4℃冰箱中储存，得到微波处理后的红小豆分离蛋白粉末；d、对制备的微波处理后的红小豆分离蛋白粉末与原样品进行二级结构的测定、内源性荧光光谱测定、粒径实验测定、表面疏水性及溶解性的测定；所述二级结构测定方法为：将原样品及不同微波处理条件进行处理得到的微波处理后的红小豆分离蛋白粉末分别置于干燥器内用P₂O₅充分干燥，各称取1mg，分别再与100mg溴化钾研磨混匀压片，测定傅立叶转换红外线光谱，在数据采集期间，为了减少水蒸气对红外光谱吸收的干扰，持续用干燥的N₂淋洗测量室，测定在波数范围为4000‑400cm^‑1各样品的吸收光谱，测量时分辨率4cm^‑1，波数精度0.01cm^‑1，扫描次数64次，环境温度25℃；所述内源性荧光光谱测定方法为：将原样品及不同微波处理条件进行处理得到的微波处理后的红小豆分离蛋白粉末样品分别与磷酸盐缓冲液同体积比混合，所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.01mol/L，pH7.0，配制的红小豆分离蛋白浓度均为0.15mg/mL，采用F‑4500荧光分光光度计测定红小豆分离蛋白的内源性荧光光谱；所述粒径测定方法为：采用ZetaPlus粒度分析仪测定原样品及不同微波处理条件进行处理得到的微波处理后的红小豆分离蛋白粉末样品的流体动力学半径及其分布，用浓度为50mmol/L、pH＝7.0的磷酸盐缓冲液将每个样品均稀释至蛋白浓度为0.2％的溶液，将稀释后的样品过0.45μm醋酸纤维膜，在室温下进行测定，取三次测量的平均值为测量结果；所述表面疏水性测定方法为：分别称取0.025g原样品及不同微波处理条件进行处理得到的微波处理后的红小豆分离蛋白粉末样品，分别溶于50mL磷酸盐缓冲液中，所述磷酸盐缓冲液浓度为0.01mol/L，pH＝7.0，在室温条件下搅拌1h，然后在10000r/min下离心30分钟，取上清液用Lowry法测定蛋白浓度，并用所述磷酸盐缓冲液将每个样品均依次稀释，稀释浓度在0.005‑0.5mol/mL之间并呈梯度增长，取稀释后不同浓度的样品溶液4mL，分别加入40μL浓度为8mmol/L的ANS溶液，所述ANS溶液采用0.01mol/L，pH7.0的磷酸盐缓冲溶液配制，经震荡后静置3分钟，然后采用F‑4500荧光分光光度计测定样品的荧光强度；所述溶解性测定方法为：分别称取500mg原样品及不同微波处理条件进行处理得到的微波处理后的红小豆分离蛋白粉末样品，分别向其中加入10ml超纯水，在磁力搅拌器上搅拌1h，使其充分溶解，随后，在4000rpm条件下离心30分钟，取2mL上清液，分别加入2mLNaN₃溶液，所述上清液与NaN₃溶液的体积比为1:1，随后至于冰箱4℃条件下保存，采用Lowry法测定可溶性以及不可溶性的红小豆分离蛋白聚集。