[发明专利]一种双单倍体及化学诱导联合作用的芥菜型油菜育种方法

摘要

本发明公开了一种双单倍体及化学诱导联合作用的芥菜型油菜育种方法，育种方法具体为：选取油菜花蕾，投入油菜单倍体诱导培养基中培养；对得到的小孢子进行暗培养，至得到子叶期胚状体；将子叶期胚状体经MS固体分化培养基、1/2MS生根培养基培养后，移入营养土中培养；将得到的单倍体植株，进行加倍处理，移入田地栽培；对得到的种子进行4代单株套袋自交，得到有稳定性状的双单倍体种子；暗培养后得到油菜幼芽；对油菜幼芽进行诱变处理，然后模拟日光培养，筛选出有高株高油抗旱性状的油菜植株，移入田地进行培养，进行连续6代单株套袋自交，即得。本发明采用的育种方法制种效率高，制种年限短，制种性状稳定且具有特殊性状。

主权项

一种双单倍体及化学诱导联合作用的芥菜型油菜育种方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤S01，选取单核晚期或者二核期的芥菜型油菜花蕾，用去菌水清洗2次～5次，在1℃～2℃的条件下，投入油菜单倍体诱导培养基中培养6h～8h，在350r/min～500r/min的条件下进行离心分离，得到小孢子；步骤S02，将步骤S01得到的小孢子悬浮在单倍体诱导培养基中，在1℃～3℃的温度条件下，暗培养4h～6h，至小孢子生长为胚状体时，在温度为30℃～35℃，转速为70r/min～85r/min的条件下，调节单倍体诱导培养基的pH为6.3～6.8，进行暗培养，得到子叶期胚状体；步骤S03，将步骤S02得到的子叶期胚状体接种至MS固体分化培养基，在28℃～32℃的温度条件下，用150W～350W氙灯模拟日光进行培养，分化芽长出后接种至1/2MS生根培养基，生根、炼苗后移入营养土中培养，得到单倍体植株；步骤S04，将步骤S03中得到的单倍体植株进行优选，用浓度为150mg/L～300mg/L的秋水仙碱对优选的单倍体植株的根系进行加倍处理，用流式细胞仪进行倍性分析，筛选出双单倍体植株，移入田地进行正常栽培，得到双单倍体植株的种子；步骤S05，对步骤S04中得到的双单倍体植株的种子进行4代单株套袋自交，得到有稳定性状的双单倍体种子，备用；步骤S06，对步骤S05中得到的有稳定性状的双单倍体种子在33℃～36℃的温度条件下，在KM‑8P培养基中进行暗培养20h～40h，至种子发芽，得到芽长为2cm～3.5cm的油菜幼芽，备用；步骤S07，对步骤S06中得到的芽长为2cm～3.5cm的油菜幼芽，移入化学诱变培养皿中进行诱变处理60h～96h，再转入1/2MS固体培养皿中，模拟日光培养至芽长为10cm～14cm的油菜幼苗，筛选出有高株高油抗旱性状的油菜植株，移入田地进行培养，保证无外来花粉进入，与其他油菜种植田至少距离2km，进行连续6代单株套袋自交，即得稳定高株高油性状的芥菜型油菜种子。