[发明专利]膀胱癌检测试剂盒、检测方法及人类补体因子H相关蛋白在其中的应用

摘要

本发明涉及膀胱癌检测试剂盒、检测方法，其包括利用人类补体因子H形成的单克隆抗体和多克隆抗体；本发明还涉及人类补体因子H相关蛋白的应用。本发明选取BTA为检测膀胱癌的标志物，针对3个不同多肽免疫所得单抗来混合作为本发明的包被抗体，灵敏度高，特异性强；包被抗体与检测抗体为不同来源的抗原免疫所得，进而提升检测准确性。本发明检测精度高、特异性好、患者依从性高、检测方便。

主权项

一种膀胱癌检测试剂盒，其特征在于，包括多克隆抗体，利用人类补体因子H构建重组质粒pET32a‑CFH，以大肠杆菌BL21为表达宿主，然后进行蛋白纯化，得到BTA原核表达蛋白，免疫新西兰白兔，得到多克隆抗体；构建重组质粒时，正向引物序列为SEQ ID No.1，反向引物序列为SEQ ID No.2；所述多克隆抗体进行辣根过氧化酶标记来作为酶标抗体，多克隆抗体浓度为7.5μg/mL；所述试剂盒还包括单克隆抗体，选取BTA氨基酸序列中的三段合成多肽，多肽分别免疫BALB/c雌性健康小鼠，得到三个单克隆抗体1B9，5F6和6D2；所述BTA氨基酸序列中的三段合成多肽的序列分别为SEQ ID No.3、SEQ ID No.4和SEQ ID No.5；所述单克隆抗体的质量比例为1B9：5F6：6D2=2:1:3，作为包被抗体，包被缓冲液为0.01MCB，包被浓度为5μg/mL。