[发明专利]一种紫芽茶树R2R3-MYB转录因子CsMYB6A的基因克隆及载体构建方法以及应用

摘要

本发明公开了一种紫芽茶树R2R3‑MYB(CsMYB6A)基因克隆及载体构建方法以及应用，具体涉及一种紫芽茶树DNA片段的分离、克隆、功能验证及应用，该基因调控花青素合成，能够改变植物叶片的颜色，提高植物花青色的含量，将该基因转化到烟草中，能使转基因烟草叶片变红，花青素含量明显增加。

主权项

1.一种紫芽茶树R2R3‑MYB转录因子CsMYB6A基因的克隆及载体构建方法，其特征在于，步骤包括：（1）以茶树cDNA为模板，设计特异引物CsMYB6A‑ F：ATGGACATTGTTTGTTGT；CsMYB6A‑ R：TCATTCATCACCTAACAGATCCC；将attB1接头序列加至引物CsMYB6A‑ F的5′端得到CsMYB6A‑attb‑F，将attB2接头序列加至引物CsMYB6A‑ R的5′端得到CsMYB6A‑attb ‑R；CsMYB6A‑attb‑F：GGGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTGCCACCATGGACATTGTTTGTTGT；CsMYB6A‑attb‑R：GGGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTTCATTCATCACCTAACAGATCCC；（2）以测序正确的带有序列2所示CsMYB6A基因的质粒为模板进行高保真PCR，回收带有attB接头序列的目的基因产物；（3）进行BP反应，水浴后转化至Trans‑T1感受态，涂布含有庆大霉素的LB固体培养基上；（4）测序正确后提取质粒，进行LR反应；（5）测序正确后提取质粒，然后利用电转法将该质粒转入根癌农杆菌EHA105，在含有壮观霉素和卡那霉素的LB固体培养基上进行筛选，倒置培养，利用菌落PCR鉴定阳性克隆。