[发明专利]一种被双向链置换的引物型核酸荧光探针有效
| 申请号： | 201610227096.4 | 申请日： | 2016-04-12 |
| 公开（公告）号： | CN105803074B | 公开（公告）日： | 2019-12-13 |
| 发明（设计）人： | 牟颖;丁雄;金伟 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6876 | 分类号： | C12Q1/6876;C12Q1/6844;C12N15/11 |
| 代理公司： | 33200 杭州求是专利事务所有限公司 | 代理人： | 张法高;赵杭丽 |
| 地址： | 310027 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明提供一种被双向链置换的引物型核酸荧光探针，由两条5'端序列完全互补的寡核苷酸链构成，中间为双链区，两端为单链臂。本发明探针结构简单、设计合理，在扩增反应中可同时充当扩增引物和信号探针用，无须对其3'端进行化学修饰，避免了额外设计探针的过程。该探针利用核苷酸聚合酶的链置换活性，既可实现对核酸等温扩增如等温多自配引发扩增的高灵敏性实时荧光检测，又可结合离子指示剂如羟基萘酚蓝构建可视化双荧光的产物检测，并具备构建单管多重核酸等温扩增实时荧光检测的潜力，为生物、医学和化学等相关标志物诊断或检测研究提供了新的核酸荧光探针类型。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 双向 置换 引物 核酸 荧光 探针 | ||
【主权项】：
1.一种被双向链置换的引物型核酸荧光探针，其特征在于，该探针是由两条寡核苷酸链构成，二者5'端序列完全互补配对形成探针的双链区，而3'端序列无配对形成探针的两条单链臂，而且其中一条寡核苷酸链的5'端处某个核苷酸标记有荧光基团或淬灭基团，另一条寡核苷酸链的中间参与配对的某个核苷酸标记有淬灭基团或荧光基团，在扩增反应中可同时充当扩增引物和信号探针用；/n所述5'端处某个核苷酸是指5'端处最末尾核苷酸；/n所述引物型核酸荧光探针通过以下步骤实现：/n（a）在60-65℃反应温度和反应缓冲液的条件下，两条寡核苷酸链的5'端序列完全互补配对，形成探针的双链区，而没有配对的3'端序列各自形成探针的单链臂，在探针处于完整状态时，双链区的荧光基团与淬灭基团由于距离靠近而发生荧光共振能量转移，荧光被淬灭；反应缓冲液组成为0.8 M甜菜碱、20 mM Tris-HCl，pH 8.8，25℃，50 mM KCl，10 mM(NH
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