[发明专利]利用Nile red进行线虫染色检测痕量BPA方法

摘要

利用Nile red进行线虫染色检测痕量BPA方法，本发明涉及利用Nile red进行线虫染色检测痕量BPA方法，本发明的目的是为了解决现有方法检出限低的问题。本发明方法为：一、制备混合溶液A；二、将Nile red溶混合溶液A中；三、制备混合溶液C；四、在培养皿中加入混合溶液C和待测液体；五、处理BC10067线虫突变体虫卵；六、配置线虫培养基；七、处理线虫培养基；八、培养处理BC10067线虫突变体虫卵，长至成虫后，进行Nile Red发光强度检测；若发光强度大于正常生长线虫的20％，则待测液体中含有内分泌干扰物BPA。本发明实现了微量BPA的检测。本发明属于BPA检测领域。

主权项

1.利用Nile red进行线虫染色检测痕量BPA方法，其特征在于该方法按如下步骤进行：一、称取8.01g NaCl、0.2g KCl、1.78gNa2HPO4·2H2O和0.27gKH2PO4，混合后用蒸馏水定容至1000mL，再放入高压蒸汽灭菌锅中121℃灭菌18～22min，取出冷却后调节pH值为7.4，得到混合溶液A；二、称取4～6.5μg Nile red，溶于100ml混合溶液A中，得到混合溶液B；三、称取13.6g KH2PO4和1.8g KOH，混合后加蒸馏水定容至100mL，再调节pH值为6.0，得到混合溶液C；四、在培养皿中加入10mL混合溶液C，然后加入100μL待测液体，得到培养皿A；五、将8～12个BC10067线虫突变体虫卵加入培养皿A中，浸泡4h，得到处理后的BC10067线虫突变体虫卵；六、称取4～6g酵母粉、8～10g蛋白胨、8～10g琼脂、1～2g NaCl和1～2g KCl，混合后用蒸馏水定容至1000mL，放入高压蒸汽灭菌锅中121℃灭菌18～22min，转移培养皿中获得线虫培养基；七、向线虫培养基中均匀涂入1～1.5ml混合溶液B，然后接入浓度为1×109个/mL～2×109个/mL大肠杆菌OP50菌液0.8～1.2mL，再在37℃培养8～12h，得到处理后的线虫培养基；八、将步骤五处理后的BC10067线虫突变体虫卵接入步骤七的处理后的线虫培养基中，长至成虫后，用zeiss荧光显微镜进行虫体Nile Red发光强度检测；若发光强度大于正常生长线虫的20％，则待测液体中含有内分泌干扰物BPA，即完成利用Nile red进行线虫染色检测痕量BPA方法。