[发明专利]一种利用毛细管电泳快速检测甲壳类精氨酸激酶的方法

摘要

本发明公开了一种利用毛细管电泳快速检测甲壳类精氨酸激酶的方法，包括如下步骤：(1)提取虾肌肉中的全蛋白并溶于pH为7～8的平衡缓冲液中，然后加入阴离子交换层析柱中，洗脱液洗脱，收集穿透峰所对应的溶液即为样品；(2)将所得样品进行毛细管区带电泳，得电泳图谱，将电泳图谱中所得峰面积代入标准曲线回归方程计算得到样品中甲壳类精氨酸激酶的浓度。本发明用毛细管电泳快速检测水产品过敏原——甲壳类精氨酸激酶的方法，属于过敏原检测技术领域，提取虾肌肉中的全蛋白，加入到阴离子交换层析柱中，用洗脱液洗脱，收集穿透峰对应的溶液，加入毛细管电泳仪中，通过毛细管区带电泳，对样品液中的精氨酸激酶进行定性和定量检测。

主权项

1.一种利用毛细管电泳快速检测甲壳类精氨酸激酶的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)采用试剂盒提取南美白对虾虾肌肉中的全蛋白并溶于平衡缓冲液中，所述平衡缓冲液为pH为7.5的tris‑HCl溶液，所述tris‑HCl溶液的浓度为10mmol/L，然后加入阴离子交换层析柱中，0.3～0.4mol/L的NaCl溶液洗脱，收集穿透峰所对应的溶液即为样品；溶有全蛋白的平衡缓冲液以0.5ml/min的流速加入阴离子交换层析柱中，洗脱液以1.0ml/min的速度洗脱层析柱；(2)将所得样品进行毛细管区带电泳，得电泳图谱，将电泳图谱中甲壳类精氨酸激酶所对应的峰面积代入甲壳类精氨酸激酶的标准曲线回归方程中计算得到样品液中甲壳类精氨酸激酶的浓度；标准曲线线性回归方程的制作方法如下：精密配制甲壳类精氨酸激酶标准溶液5μg/mL、10μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL，按步骤(2)中电泳条件进样，每个样品重复3次，以峰面积对浓度进行线性回归，得标准曲线线性回归方程；步骤(2)中电泳条件为：毛细管选用未涂层石英毛细管柱，检测波长为214nm，进样方式为压力进样，压力为0.5psi，进样时间为5s，分离电压为15kv，毛细管柱温为25℃，运行缓冲液为pH9.2且浓度为25mmol/L的硼砂缓冲溶液。