[发明专利]一种福鼎大白商品茶的分子鉴定方法

摘要

本发明公开了一种用于福鼎大白商品茶的分子鉴定的引物组。本发明还公开了一种福鼎大白商品茶的分子鉴定方法，属分子标记技术领域。该方法将待鉴定样品PCR反应获得扩增产物测序后，与福鼎大白品种条形码比对，当扩增产物的SNP序列与福鼎大白品种条形码所示的差异碱基序列的相似性达到99.5%以上，则该待鉴定样品为福鼎大白品种。本发明克服了用感官审评或理化分析等方法难以鉴别福鼎大白茶的真伪以及山茶属下不同茶树品种的技术问题，能有效、简便快速地对福鼎大白商品茶的品种进行准确鉴定。

主权项

1.一种福鼎大白商品茶的分子鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：1）确定福鼎大白茶叶样品的45个SNP位点，其SNP序列如SEQ ID NO ：91~135所示.，在NCBI中通过blast找到的对应的45个基因序列；2）引物的设计；根据找到的45个基因序列，按照同源克隆的方法，找到近缘植物，并进行序列的比对，找到同源性较高的片段区域，设计这45个基因片段的上下游引物；所述引物序列如所述的45对引物序列，所述引物序列如SEQ ID NO ：1~90所示；3）基因组DNA提取；4）PCR扩增及检测；5）将扩增产物测序后与福鼎大白品种条形码比对，福鼎大白品种条形码的碱基序列，扩增产物的SNP序列与福鼎大白品种条形码所示的差异碱基序列的相似性达到99.5%以上，则该待鉴定样品为福鼎大白品种；所述基因组DNA提取采用以下方法从叶片中提取基因组DNA，对于大量鉴定样品，其基因组DNA提取操作步骤如下：S1）将50 mg叶片称重后放入96孔样品收集管中；S2）在收集管中，加入碳化钨珠与石英砂，并用软胶盖住收集管；S3）65℃预热AP1缓冲液，将90 mL预热的AP1缓冲液与225 µl RNase A、225 µl Reagent DX混合均匀，放于65℃中水浴；S4）将2块96孔样品收集管放于自动化样品研磨机中将样品研磨充分；S5）用排枪在每个收集管中加入400 µl裂解液，盖上新的软胶盖后，上下摇晃混匀；S6）离心，转速达3000 rpm即可停止；S7）加入130 µLAP2缓冲液，涡旋充分后，将96孔板放于‑20℃冰箱静置10 min；S8）将96孔板6000 rpm离心5 min；S9）扔掉盖子，将每个收集400 µl上清液转移至新的96孔收集管中；S10）在每个收集管中中加入1.5体积AP3/E缓冲液，盖上新的软胶盖；S11）上下剧烈震摇15 s，离心，转速达到3000 rpm时离心；S12）将两个DNeasy 96 Plates置于S‑Blocks上面，做好标记；S13）从收集管上除去并扔掉盖子，小心将每个样品1 ml转移到DNeasy 96 Plates；S14）用AirPore Tape Sheet 密封DNeasy 96 Plate，在6000 rpm 下离心4 min；S15）除去胶纸，在每个样品中加入500 µl 缓冲液AW；S16）用AirPore Tape密封Sheet DNeasy 96 Plate，在6000 rpm下离心15 min使DNeasy膜干燥；S17）除去AirPore Tape，在每个样品中加入50µl 65℃预热的AE缓冲液，在15‑25℃室温下放置20 min，在6000 rpm下离心2 min；S18）重复第18步；S19）将提取的DNA标记详细信息，存放于‑20℃冰箱备用。