[发明专利]一种简化测定水稻直链淀粉和支链淀粉相对分子量的凝胶渗透色谱法

摘要

为解决以往手工过分析柱收集或淀粉与非淀粉成分分离纯化过程中预糊化对淀粉的损失的技术问题，本发明提供一种简化测定水稻直链淀粉和支链淀粉相对分子量的凝胶渗透色谱法。一种简化测定水稻直链淀粉和支链淀粉相对分子量的凝胶渗透色谱法，该方法包括如下步骤：步骤1：稻米粉的前处理：碾精度为85‑95%的精米磨成过0.42 mm或0.59 mm细度筛的精米粉；步骤2：淀粉纯化:脱去脂肪和可溶性糖；步骤3:糊化淀粉和直、支链分离，步骤4:凝胶渗透色谱仪器参数，采用pH=4.75的0.05 mol/L乙酸铵溶液作为流动相，流速为1.0 ml/min；步骤5：系列标样设置和标准曲线绘制。 1

主权项

1.一种简化测定水稻直链淀粉和支链淀粉相对分子量的凝胶渗透色谱法，其特征在于该方法包括如下步骤：

步骤1：稻米粉的前处理：碾精度为85‑95%的精米磨成过0.42 mm或0.59mm细度筛的精米粉；

步骤2：淀粉纯化:脱去脂肪和可溶性糖

精米粉与100%色谱纯甲醇混匀并于100℃加热10分钟后于10,000 g离心5分钟后收集沉淀物，此步骤重复2‑3次，并合并沉淀物；精米粉与甲醇的用量比为0.6mg/1.0ml；

步骤3: 糊化淀粉和直、支链分离；

步骤4: 凝胶渗透色谱仪器参数

采用Ultrahydrogel 120和250串联柱子，采用pH=4.75的0.05 mol/L 乙酸铵溶液作为流动相，流速为1.0 ml/min, 柱保温箱温度为40℃和示差检测器；

步骤5：系列标样设置和标准曲线绘制

采用系列分子量的糖多聚物为标样，绘制标准曲线和预测所测样品直链淀粉和支链淀粉的相对分子量大小。

2.根据权利要求1所述的简化测定水稻直链淀粉和支链淀粉相对分子量的凝胶渗透色谱法，其特征在于所述步骤3的具体参数是：取沉淀物加入0.25 mol/L NaOH溶液中，沉淀物与NaOH溶液的比例为50 mg：1.0 ml，糊化完全，混匀后加入适量pH=4.0 的0.5 mol/L 醋酸钠溶液，再加入适量酶活大于250 U的异淀粉酶于40℃ 反应2 hr以上，直至反应完全；然后，沸水加热5分钟，10,000 g 离心5‑10分钟，取上清液；加入适量离子交换树脂AG501‑X8，于50℃水浴摇床30 min, 后16000 g 离心10分钟，过0.45µm PVDF小柱，保持40℃后进行凝胶渗透色谱进样测定。

3.根据权利要求1所述的简化测定水稻直链淀粉和支链淀粉相对分子量的凝胶渗透色谱法，其特征在于：糊化的方法是沸水浴5‑10分钟或50℃烘箱2‑3小时或室温过夜至溶液清澈。

4.根据权利要求1所述的简化测定水稻直链淀粉和支链淀粉相对分子量的凝胶渗透色谱法，其特征在于：所述步骤5的具体参数是：采用Mp为344000,107000,47100,9600和5900五点标准曲线，得到标准曲线，并由此预测所测样品的直链淀粉和支链淀粉的相对分子量。