[发明专利]应用线虫Hsp12.2蛋白表达量作为标识物鉴定农药滴丁酯的方法

摘要

应用线虫Hsp12.2蛋白表达量作为标识物鉴定农药滴丁酯的方法，本发明涉及一种农药滴丁酯的检测方法，它为了解决现有农药滴丁酯的检测方法的检出限较低的问题。鉴定方法：一、配置培养液；二、加入待测液体；三、再接入秀丽隐杆线虫进行培养；四、配置浸泡液；五、冻融后的线虫置于浸泡液中；六、配置反应试剂；七、反应试剂中加入Hsp12.2蛋白抗体和线虫，孵育处理；八、加入荧光标记的二抗染色；九、进行荧光强度检测，完成滴丁酯的检测。本发明通过线虫Hsp12.2蛋白表达量作为标识物鉴定农药滴丁酯，可检测出浓度为0.002％的滴丁酯，实现了对可疑农药的高效检测。

主权项

1.应用线虫Hsp12.2蛋白表达量作为标识物鉴定农药滴丁酯的方法，其特征在于是按下列步骤实现：一、将0.3g KH2PO4、0.6g Na2HPO4和0.4～0.6g NaCl溶于100mL去离子水中，得到培养液；二、将步骤一得到的10mL培养液置于培养皿中，然后加入待测液体，得到待测培养液体；三、向待测培养液体中接入100～120条秀丽隐杆线虫进行培养3.5～4.5h，得到接有秀丽隐杆线虫的待测培养液；四、将0.8gNaCl、0.02g KCl、0.18gNa2HPO4·2H2O和0.01gKH2PO4混合，用蒸馏水定容至100mL，调节体系的pH＝7.0～7.5，再加入10g牛血清蛋白，得到浸泡液；五、取出步骤三中的秀丽隐杆线虫置于液氮中反复冻融多次，然后放入步骤四的浸泡液中浸泡1～2小时，得到浸泡处理的秀丽隐杆线虫；六、将2.4g的Tris-Base、8.8g的NaCl和0.5mL的Tween 20混合，然后用去离子水定容至1000mL，得到反应试剂；七、将0.1g Hsp12.2蛋白抗体加入5mL步骤六的反应试剂中，然后加入浸泡处理的秀丽隐杆线虫，在摇床上摇动孵育处理，得到孵育处理的秀丽隐杆线虫；八、通过浸泡液清洗孵育处理的秀丽隐杆线虫，然后加入0.1g荧光标记的二抗染色处理，得到染色后的秀丽隐杆线虫；九、在荧光显微镜下进行荧光强度检测，通过显微分析量化Hsp12.2蛋白表达量，检测待测液体中是否含有农药滴丁酯。