[发明专利]一种基于CdZnSe三元量子点的光谱型电致化学发光免疫检测方法

摘要

本发明涉及一种基于CdZnSe三元量子点的光谱型电致化学发光免疫检测方法。主要包括(1)双稳定剂包被的CdZnSe量子点的制备，(2)CdZnSe量子点标记二抗(Ab2∣CdZnSe NCs)制备，(3)以CdZnSe量子点为标记物的ECL免疫传感器的制备和(4)免疫传感器的ECL光谱检测四个步骤。本发明方法检测的灵敏度较高，甲胎蛋白抗原检测限达到10.0fg/mL。本发明构建的电化学发光免疫传感器是基于抗原和抗体之间的特异性识别和结合构建的，其他蛋白的干扰小，选择性好。

主权项

一种基于CdZnSe量子点的ECL光谱型免疫检测方法，包括步骤如下：（1）双稳定剂包被的CdZnSe量子点的制备室温下，将0.20 mol/L CdCl2溶液加入到100 mL圆底三颈烧瓶中，加超纯水稀释至50 mL；依次向圆底三颈烧瓶中加入 Zn(CH3COO)2和 HMP，搅拌5 min后加入MPA；用NaOH将溶液pH调至8.0，缓慢加入Na2SeO3溶液，待上述溶液在100℃下加热回流10 min后，加入N2H4·H2O；取回流时间为6h的溶液，4℃避光放置；其中Cd2+：Zn：Se：HMP：MPA：N2H4·H2O的摩尔比为1：1：（0.05‑0.2）：（0.3‑0.7）：（2‑3）：400；（2）Ab2| CdZnSe NCs的制备向双稳定剂包被的CdZnSe 量子点溶液中加入含等体积EDC和NHS的PBS缓冲溶液，于室温下反应活化30 min，然后离心得沉淀；将沉淀重新分散到PBS缓冲溶液中，加入Ab2，室温下震荡摇匀3 h后，加入BSA封闭未反应的活性位点；封闭30 min后，离心得沉淀，将沉淀重新分散到PBS缓冲溶液中，得Ab2| CdZnSe NCs；（3）以CdZnSe 量子点为标记物构建光谱型ECL免疫传感器a、将GCE用0.3 µm的抛光粉抛光至镜面，用超纯水洗去电极表面多余的抛光粉，并用氮气吹干；将玻碳电极置入含ABA的缓冲液中，在0.4‑1.2 V电位区间内、以10 mV/s扫速循环伏安扫描两圈，得到GCE∣ABA，用无水乙醇、超纯水依次清洗所得修饰电极；b、分别取等量 EDC、NHS滴涂于步骤（a）所述修饰电极上，活化电极表面的羧基，37℃反应30 min后冲洗电极表面三次；将Ab1滴加在GCE∣ABA表面，37℃反应2 h，将Ab1以共价偶联的方式固定在电极表面，得GCE∣ABA‑Ab1；c、将GCE∣ABA‑Ab1清洗后，向电极表面滴加BSA 溶液，37℃反应1 h以封闭未反应的活性位点；d、将步骤（c）得到的电极清洗后，取Ag滴加在电极表面，37℃反应90 min，通过抗原抗体特异性结合实现Ag在电极表面的固定，得GCE∣ABA‑Ab1<Ag；然后将GCE∣ABA‑Ab1<Ag在Ab2∣CdZnSe NCs溶液中37℃孵育90 min，将量子点固定在电极表面，形成免疫复合物修饰电极，得GCE∣ABA‑Ab1<Ag> Ab2∣CdZnSeNCs；（4）光谱型ECL免疫检测以步骤（3）制得的三元量子点为标记物的光谱型ECL免疫传感器为工作电极，铂电极为对电极、Ag/AgCl电极为参比电极，在含0.01‑0.1 mol/L过硫酸铵的PBS缓冲溶液中，对制得的光谱型ECL免疫传感器进行电致化学发光光谱测试。