[发明专利]基于核酸序列编码的ELISA检测芯片及其制备和应用

摘要

本发明公开了一种基于核酸序列编码的ELISA检测芯片及其制备和应用；所述芯片的制备包括将编码核酸、捕获分子固定在微纳米珠表面形成微纳米珠复合物的步骤、在所得微纳米珠复合物表面固定靶向标志物、带有标记的检测分子形成微纳米珠复合体的步骤、将所得微纳米珠复合体装载至分布有微纳米坑阵列的基底上制备ELISA检测芯片的步骤以及ELISA检测和编码核酸解码步骤。与现有技术相比，本发明可在一张芯片上同时检测海量样品及多种标志物，ELISA检测在微纳米坑内进行，反应体积可小于10^‑24L级，可大大降低试剂用量。本发明可广泛用于临床医学检测、献血者检测、体检、农副产品毒素、非法食品添加物及环境污染的检测。

主权项

1.一种基于核酸序列编码的ELISA检测芯片的制备方法，其特征在于，包括将编码核酸、捕获分子固定在微纳米珠表面形成微纳米珠复合物的步骤、在所得微纳米珠复合物表面固定靶向标志物、带有标记的检测分子形成微纳米珠复合体的步骤、将所得微纳米珠复合体装载至分布微纳米坑阵列的基底上制备ELISA检测芯片的步骤；应用制得的ELISA检测芯片检测时，包括先ELISA检测、后测序解码从而确定待测样品溶液中所含靶向标志物的步骤，或者先测序解码、后ELISA检测从而确定待测样品溶液中所含靶向标志物的步骤；其中，所述ELISA检测具体为向所述的ELISA检测芯片上加入检测分子底物溶液、充分反应后测试；或者加入发光试剂后直接进行光学检测；所述测序解码包括对所述微纳米坑装载微纳米珠复合体上的编码核酸进行测序；所述编码核酸除含有编码区以外，还依据测序方法的不同而带有至少一段供引物或探针配对的必要序列；其中所述测序方法，可以是合成测序，也可以是连接测序；所述微纳米坑阵列中，依据所采用的微纳米珠直径的大小，微纳米坑直径和深度控制在大于和小于之间；微纳米坑的中心间距依据测序和ELISA检测所采用的荧光、发光材料而异，2色或多色光学检测时，样点中心间距不小于其中最长波长的1/2。