[发明专利]一种黄绿木霉菌株及用其制备铁皮石斛烟用香料的方法

摘要

本发明公开了一种黄绿木霉菌株及用其制备铁皮石斛烟用香料的方法。所述菌株为黄绿木霉(Trichoderma aureoviride)HLMM‑04CGMCC No.10839，具有产纤维素酶，进而促进纤维素分解成寡糖或单糖的能力。将菌株通过活化、发酵、过滤、透析制得纤维素酶粗酶液，用于发酵铁皮石斛，再经提取、过滤、减压浓缩制成烟用香料。HLMM‑04菌株的最适产酶条件为培养基初始pH为6.5，培养温度为28℃，培养时间为5d。卷烟加香结果表明，所制备的香料具有丰富烟香，增强口腔生津感，减少杂气、刺激性，舒适余味的作用。

主权项

1.一种制备铁皮石斛烟用香料的方法，包括以下步骤：(1)将保藏编号为CGMCC No.10839的黄绿木霉HLMM‑04(Trichoderma aureoviride)菌株活化两次后，接种于装有200mL PDA液体培养基的三角瓶中，在20～35℃，180rpm下发酵培养1～7d；所述的PDA液体培养基：马铃薯200g，葡萄糖20g，补蒸馏水至1L，pH5.5～8.5，115℃高压灭菌15min；所述的黄绿木霉HLMM‑04 CGMCC No.10839菌株，具有产纤维素酶，进而促进纤维素分解成寡糖或单糖的能力；(2)发酵液过滤去除菌体，取上清液缓慢加入硫酸氨至80％饱和度，4℃下静置过夜，离心收集沉淀物并溶于2mL缓冲液中，再用缓冲液进行透析，得到粗酶液；所述的缓冲液为：0.02mol/L Na2HPO4‑NaH2PO4，pH 7.3；(3)将铁皮石斛去污洗净，破碎后加入两倍重量的水，混合均匀，调pH至6.0；加入黄绿木霉HLMM‑04粗酶液，发酵，粗酶液添加量为铁皮石斛质量的5％～20％，发酵温度为30℃，发酵时间2～5h；回流提取3h，过滤除渣，将上清液减压浓缩，即得所需烟用香料。