[发明专利]一种以效应为导向的目标/非目标雄激素干扰物鉴别方法

摘要

本发明公开了一种以效应为导向复杂环境样品中目标/非目标雄激素干扰物鉴别方法，其步骤为：样品前处理及初步分离；雄激素活性测试；致毒物质的高通量分离与制备；基于高效液相色谱–飞行时间质谱的活性组分扫描；雄激素干扰物目标性筛选；结合质谱、色谱和毒性特征的雄激素干扰物非目标性鉴别与毒物确认。本发明利用SPE柱和制备分离相串联的方法进行分离，将DMSO作保护剂优化高通量分离浓缩方法，利用目标数据库实现关键毒物目标性鉴别，基于高效液相色谱–飞行时间质谱谱库进行质谱特征鉴别、基于保留时间与化合物物化性质进行色谱特征鉴别、基于分子动力学模拟技术进行毒性特征鉴别，进而实现关键雄激素干扰物的非目标性识别与毒物确认。

主权项

1.一种以效应为导向的目标/非目标雄激素干扰物鉴别方法，其步骤为：(1)样品的提取：固态样品干燥研磨过筛后利用加速溶剂萃取来提取其中的有机物质；液态样品经离心或过膜后利用固相萃取小柱实现不同极性污染物的同时富集；(2)初步分离：基于固相萃取小柱，利用不同极性有机溶剂洗脱来进行初步分离；固态样品富集液利用氨基柱与HLB小柱串联进行富集和净化，液态样品利用HLB小柱进行富集和净化；(3)雄激素活性测试：基于稳定转染的MDA‑Kb2细胞系，测试拟、抗雄激素活性；(4)高通量分离与制备：针对活性效应组分，基于物质极性利用制备色谱进行分级分离，或基于物质分子量大小利用凝胶排阻色谱分离，添加保护液后氮吹，制备获得次级组分；(5)次级组分活性测试：针对步骤(4)所得组分，利用MDA‑Kb2细胞系测试组分的拟、抗雄激素活性；(6)活性次级组分中关键毒物定性识别：基于高效液相色谱‑飞行时间质谱，进行扫描分析，得到一级及二级质谱；(7)关键毒物目标性筛选：建立可疑雄激素活性物质数据库，导入目标毒物数据库，对目标物进行精确质量数计算和碎片分析，利用软件计算可能的碎裂方式及离子，比对一级和二级质谱来进行目标物质的筛选；(8)活性组分的非目标物质筛选：结合获得的色谱特征、质谱特征和毒性特征筛选非目标性活性物质；(9)毒物确认：购买标准品进行定量分析并测定EC50，计算毒物的毒性贡献率，将毒物按照定量分析的浓度配置到原空白介质中并进行毒物提取与毒性确认。