[发明专利]一种有机磷类和氨基甲酸酯类农药的免疫学检测方法及试剂盒

摘要

本发明公开了一种检测有机磷类和氨基甲酸酯类农药的免疫学方法，其用免疫学方法检测胆碱酯酶底物变化情况，以推断样品中是否含有有机磷类和氨基甲酸酯类农药。本发明还公开了一种检测有机磷类和氨基甲酸酯类农药的试剂盒。本发明通过间接检测胆碱酯酶的活性来判定被检样品中有机磷和氨基甲酸酯类农药的残留情况，具有检测范围广、高灵敏、简便易行、费用低廉。

主权项

1.一种检查有机磷类和氨基甲酸酯类农药的免疫层析方法，包括如下步骤：（1）金标抗DTNB （5,5‑二硝基‑双（2‑硝基苯甲酸）单克隆抗体的制备：取10ml粒径40nm 的纳米金颗粒，加入10μg抗DTNB单克隆抗体；室温反应15min；加入BSA至终浓度1%（W/V），继续室温反应15min；离心，用1ml 复溶液重悬颗粒，备用；其中，所述复溶液的配方为0.5%（W/V）BSA和 10mM pH8.0 Tris‑HCl；（2）层析膜的制备：往赛多利斯CN95硝酸纤维素膜上按照0.8μl/cm的量依次在DTNB检测区喷涂浓度为2mg/ml的DTNB‑载体蛋白偶联物，在质控区喷涂浓度为0.05mg/ml的羊抗鼠IgG，置于37℃ 干燥2h，备用；（3）样品垫的制备：用样品垫处理液浸泡无纺布 10min；置于37℃干燥，备用；其中，所述样品垫处理液的配方为1%（W/V）BSA、0.5%（V/V）Tween 20、和20mM pH8.0 Tris‑HCl；（4）试纸条的组装：试纸条包括底板，以及依次搭接粘贴在底板上的样品垫、层析膜、吸水垫；试纸条的层析膜上由样品垫到吸水垫方向依次设有DTNB检测区、质控区；（5）检测样品：1）往反应微孔1中加入20ng 硫代丁酰胆碱、200μl待检样品、5U丁酰胆碱酯酶，吹打混匀；置于40℃孵育10min；2）将反应微孔1中的液体转至含有 80ng DTNB的反应微孔2中，吹打混匀；3）将反应微孔2中的液体转至含有8μ l金标抗DTNB单克隆抗体的反应微孔3中，吹打混匀，置于40℃下3min；4）将试纸条的样品垫一端插入反应微孔3中，3min后观察结果。