[发明专利]一种玉米初生根组织冰冻切片方法

摘要

本发明涉及一种玉米初生根组织冰冻切片方法，包括以下步骤：①、取材：将玉米种子用75%酒精消毒1 min，去离子水冲洗3次，黑暗条件中催芽，待种子露白后正常光条件下培养至7d，得新鲜的植物材料；②、包埋：将①中新鲜的植物材料徒手切片成2 cm，用包埋剂将其固定9 min后至于冷冻台上；③、切片：将②中冷冻后的样品放置到冷冻切片机上，将冷冻切片机上的切片厚度调至50μm，用样品快进按钮将样品移近刀口开始修片，修好后放下防卷板切片；④、展片和观察：将③中的切片挑到载玻片上，用蒸馏水洗干净，在洗净后切片上滴加一滴10%甘油，转移到显微镜下10倍观察。该方法可以解决植物组织化学、免疫定位和原位杂交等研究中切片组织难以完整获得的难题。

主权项

一种玉米初生根组织冰冻切片方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：①、取材：选取长势饱满的玉米种子，将玉米种子用75%酒精消毒 1 min后，去离子水冲洗3次，转移到人工智能气候培养箱黑暗条件中催芽，待种子露白后置于人工智能气候培养箱正常光条件下培养至7d，得新鲜的植物材料；所述人工智能气候培养箱条件：温度25℃、湿度60%、光周期：光照：黑暗=8h:16h；②、包埋：启动冷冻切片机将冷台温度调至‑17℃，样品头温度调至‑15℃，将①中新鲜的植物材料徒手切片成 2 cm，用包埋剂将其固定 9 min后至于冷冻台上，制备冷冻样品；③、切片：将②中冷冻后的样品放置到冷冻切片机的样品头上，将冷冻切片机上的切片厚度调至50μm，用样品快进按钮将样品移近刀口，调整要切的平面，利用慢进按钮开始修片，修好后即可放下防卷板切片，切片时需注意用力均匀；④、展片和观察：用毛笔轻轻将③中的切片挑到载玻片上，用蒸馏水将切片上包埋液清洗干净，在洗净后切片上滴加一滴10%甘油，转移到显微镜下10倍观察，所获得的玉米初生根冷冻切片解剖结构完整清晰。